자가포식 특이적 억제제 발굴을 위한 스크리닝 방법
Assay method for autophagy-specific inhibitor screening
특허 요약
본 발명은 자가포식을 억제할 수 있을 것으로 예상되는 후보물질 및 다양한 화합물, 펩타이드, 압타머등의 라이브러리를 처리하고, 이에 의하여 자가포식 현상의 초기단계에 중요한 역할을 하는 Vps34-Beclin1-ATG14L 복합체의 형성의 저해 여부를 in vitro상에서 고처리량 검정에 적합하게 판별할 수 있는 자가포식 특이적 억제제의 스크리닝 방법, 상기 방법에 사용될 수 있는 키트 및 Vps34 또는 이를 포함하는 복합체에 결합할 수 있는 목적 단백질의 결합력을 분석하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 제공하는 자가포식 억제제 스크리닝 방법을 이용하면, 자가포식 현상을 특이적으로 억제할 수 있는 제제를 발굴할 수 있으므로, 자가포식의 억제를 통한 다양한 질환 치료용 조성물의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.
청구항
번호청구항
1

(a) Vps34(vacuolar protein sorting 34)-Beclin1-ATG14L(autophagy related 14) 복합체에 자가포식을 특이적으로 억제할 수 있을 것으로 예상되는 후보물질을 처리하는 단계; 및 (b) 상기 Vps34를 통해 Beclin1 및 ATG14L의 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 자가포식 억제제의 스크리닝 방법.

2

제1항에 있어서,상기 Vps34(vacuolar protein sorting 34)-Beclin1-ATG14L(autophagy related 14) 복합체는 담체에 고정된 것인 방법.

3

제1항에 있어서,상기 (b) 단계에서 측정된 Beclin1의 수준은 후보물질과의 반응이전의 Beclin1의 수준보다 감소되지 않고, 상기 (b) 단계에서 측정된 ATG14L의 수준이 후보물질과의 반응이전의 ATG14L의 수준보다 감소된 경우, 상기 후보물질이 자가포식 억제제인 것으로 판정하는 것인 방법.

4

(a) Vps34(vacuolar protein sorting 34)-Beclin1 복합체에 자가포식을 특이적으로 억제할 수 있을 것으로 예상되는 후보물질과 ATG14L(autophagy related 14)을 처리하는 단계; 및 (b) 상기 Vps34-Beclin1 복합체에 결합된 ATG14L의 수준을 확인하는 단계를 포함하는, 자가포식 억제제의 스크리닝 방법.

5

제4항에 있어서,상기 Vps34(vacuolar protein sorting 34)-Beclin1 복합체는 담체에 고정된 것인 방법.

6

제4항에 있어서,상기 (b) 단계에서 측정된 ATG14L의 수준이, 상기 후보물질을 처리하지 않고 ATG14L 만을 가하여 반응시켜서 확인된 ATG14L의 수준에 비하여 감소된 경우, 상기 후보물질이 자가포식 억제제인 것으로 판정하는 것인 방법.

7

Vps34(vacuolar protein sorting 34)-Beclin1 복합체, ATG14L(autophagy related 14), Beclin1의 수준을 측정할 수 있는 제제 및 ATG14L의 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는 자가포식 억제제 스크리닝용 키트.

8

제7항에 있어서,상기 Vps34-Beclin1 복합체는 담체에 고정된 것인 키트.

9

제7항에 있어서,상기 Beclin1의 수준을 측정할 수 있는 제제는 Beclin1에 특이적으로 결합할 수 있는 항체인 것인 키트.

10

제7항에 있어서,상기 ATG14L의 수준을 측정할 수 있는 제제는 ATG14L에 특이적으로 결합할 수 있는 항체인 것인 키트.

11

제7항에 있어서,Vps34-Beclin1-ATG14L 복합체가 고정된 96웰 플레이트, Beclin1의 수준을 측정할 수 있는 제제 및 ATG14L의 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는 것인 키트.

12

(a) Vps34(vacuolar protein sorting 34) 또는 상기 Vps34를 포함하는 복합체에 상기 Vps34 또는 복합체와의 결합력을 측정하고자 하는 목적 단백질을 농도별로 처리하여 각각의 결합체를 수득하는 단계; 및, (b) 상기 목적 단백질의 처리 농도에 따른 결합체 농도를 측정하여, 상기 Vps34 또는 복합체에 대한 목적 단백질의 결합력을 측정하는 단계를 포함하는, Vps34 또는 이를 포함하는 복합체에 결합할 수 있는 목적 단백질의 결합력을 분석하는 방법.

13

제12항에 있어서,상기 Vps34 또는 상기 Vps34를 포함하는 복합체는 담체에 고정된 것인 방법.

14

제12항에 있어서,상기 (a) 단계의 복합체는 Vps34-Beclin1 복합체인 것인 방법.

15

제12항에 있어서,상기 (a) 단계의 목적 단백질은 Beclin1 또는 ATG14L(autophagy related 14)인 것인 방법.

16

제12항에 있어서,상기 (b) 단계의 결합력 측정은, (a) 단계에서 처리된 목적 단백질의 농도와 (b) 단계에서 측정된 결합체의 농도를 이용하여 작성된 결합곡선(binding curve)을 이용하여 수행되는 것인 방법.