디카르복실산을 생산하는 형질전환 미생물 및 이를 이용한 디카르복실산 생산방법
TRANSFORMED MICROORGANISM PRODUCING DICARBOXYLIC ACID AND A METHOD FOR PRODUCING DICARBOXYLIC ACID USING THE SAME
특허 요약
본 발명은 지방산으로부터 디카르복실산을 생산하는 형질전환 미생물 및 이를 이용하여 디카르복실산을 생산하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 형질전환 미생물은 지방산을 디카르복실산으로 생체 내 변환하는 과정에서 자일로오스 환원효소를 이용하여 자일리톨 변환을 통해 보조인자 재생을 가능하게 함으로써 기존의 ω-산화경로를 이용한 디카르복실산 생산과정의 문제점을 개선하였다. 또한, 본 발명의 형질전환 미생물은 높은 기질 전환율을 보일 뿐만 아니라 디카르복실산의 생산량이 증가하였다. 따라서, 본 발명의 형질전환 미생물은 디카르복실산을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
12

(a) 제1항의 형질전환 미생물을 배양하고, 휴지기 상태의 미생물을 수확하는 단계; 및(b) 휴지기 상태의 형질전환 미생물 배양액에 C10, C12, C14, C16, C16:1, C18 및 C18:1로 이루어진 군으로부터 선택되는 포화 지방산 또는 불포화 지방산을 첨가하는 단계를 포함하는 디카르복실산 생산방법.

7

제 6항에 있어서,상기 AlkL 유전자가 서열번호 6으로 표시되는 염기서열인 것인, 형질전환 미생물.

8

제 1항에 있어서,상기 미생물이 ADH1 유전자를 더 포함하는 것인, 형질전환 미생물.

9

제 8항에 있어서,상기 ADH1 유전자가 서열번호 7로 표시되는 염기서열인 것인, 형질전환 미생물.

10

제 1항에 있어서,상기 미생물이 ALD5 유전자를 더 포함하는 것인, 형질전환 미생물.

11

제 10항에 있어서,상기 ALD5 유전자가 서열번호 8로 표시되는 염기서열인 것인, 형질전환 미생물.

1

시토크롬 P450 모노옥시게나제와 시토크롬 450 환원효소의 결합 유전자(CYP-NCP) 및 자일로오스 리덕타아제(XR) 유전자가 도입된 형질전환 미생물.

2

제 1항에 있어서,상기 CYP-NCP 유전자는 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 갖는 것인, 형질전환 미생물.

3

제 1항에 있어서,상기 XR 유전자는 서열번호 2 또는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 암호화하는 염기서열인 것인, 형질전환 미생물.

4

제 3항에 있어서,상기 서열번호 2 또는 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 암호화하는 염기서열은 서열번호 3 또는 서열번호 5로 표시되는 염기서열인 것인, 형질전환 미생물.

5

제 1항에 있어서, 상기 미생물이 fadE 및 fadR 유전자를 넉 아웃(knock out)시킨 대장균인 것인, 형질전환 미생물.

6

제 1항에 있어서,상기 미생물이 AlkL 유전자를 더 포함하는 것인, 형질전환 미생물.

13

제 12항에 있어서,5-아미노레불린산(aminolevulinic acid, ALA), 티오우레아, 인산 완충액, 항생제, 트윈80, 미량원소 용액 및 이의 조합에서 이루어진 군에서 선택되는 물질을 첨가하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 디카르복실산 생산방법.

14

제 12항에 있어서,상기 배양이 25 내지 37℃의 온도에서 이루어지는 것을 특징으로 하는, 디카르복실산 생산방법.

15

제 12항에 있어서,상기 배양이 글루코스, 자일로오스 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 보조 기질(co-substrate)의 존재 하에 이루어지는 것을 특징으로 하는, 디카르복실산 생산방법.