LPcin-Ⅰ펩타이드 또는 LPcin-Ⅱ 펩타이드를 포함하는 재조합 발현벡터 및 이를 이용한 펩타이드의 대량생산방법
Recombination expression vector comprising LPcin-Ⅰ or LPcin-Ⅱ peptide and mass-production method of peptide thereof
특허 요약
LPcin-Ⅰ펩타이드 또는 LPcin-Ⅱ 펩타이드를 포함하는 재조합 발현벡터 및 이를 이용한 펩타이드의 대량생산방법이 제공된다. 이를 통해, 종래에 경제성이 없어 항균제로 활용할 수 없었던 LPcin-Ⅰ펩타이드를 항균제로 상용화하는 것이 가능하다. 나아가, LPcin-Ⅰ펩타이드 및 LPcin-Ⅱ 펩타이드를 대량으로 수득할 수 있으므로, 미세량만으로는 수행할 수 없었던, 상기 펩타이드들의 3차원 구조를 규명하는데 대단히 유용하다. 이를 통해 LPcin-Ⅰ펩타이드의 아미노산 서열이 LPcin-Ⅱ 펩타이드의 아미노산 서열을 포함하는데도 불구하고 LPcin-Ⅰ펩타이드만이 항균성을 가지는 이유를 NMR 등을 통해 3차원적으로 규명하여 향후 LPcin-Ⅰ펩타이드의 필수 아미노산 서열을 도출하는데 중요한 역할을 담당할 수 있다. LPcin-Ⅰ펩타이드, LPcin-Ⅱ 펩타이드, 대량생산방법
청구항
번호청구항
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제1항에 있어서, 상기 발현 카세트는 N-말단 또는 C-말단에 5-7개의 히스티딘 아미노산을 코딩하는 유전자가 연결된 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터.

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제1항에 있어서, 상기 LPcin-Ⅰ펩타이드 또는 LPcin-Ⅱ 펩타이드는 1 ~ 8회 반복되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터.

1

a) 혼성 파트너 결합단백질로서 케토스테로이드 이성질체화효소(KSI)를 코딩하는 유전자 및 b) 서열번호 1, 2 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 LPcin-Ⅰ펩타이드를 코딩하는 유전자 또는 서열번호 3, 4 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 LPcin-Ⅱ 펩타이드를 코딩하는 유전자가 작동적으로 결합된 발현 카세트를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터.

2

제1항에 있어서 상기 재조합 발현벡터는 도 1의 개열지도를 갖는 pET31b(+)/KSI-(LPcin-I)n-His6 또는 pET31b(+)/KSI-(LPcin-II)n-His6인 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터.

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제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 재조합 발현벡터로 형질전환된 대장균.

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  1. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 재조합 발현벡터로 대장균을 형질전환하는 단계; 2) 상기 형질전환된 대장균을 배양하여 융합 단백질을 과발현시키는 단계; 3) 상기 발현된 융합 단백질을 용해하여 불용성 재조합 융합단백질(Inclusion Bodies)로 상기 대장균으로부터 회수하는 단계; 4) 상기 불용성 재조합 융합단백질을 Ni-친화성 크로마토그래피로 정제하는 단계, 5) 상기 정제된 불용성 재조합 융합단백질을 산성조건에서 CNBr로 절단하는 단계; 및 6) 상기 절단된 불용성 재조합 융합단백질을 역상 HPLC를 수행하여 LPcin-Ⅰ펩타이드 또는 LPcin-Ⅱ 펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드의 대량생산방법.