체외 이종 난소 및 난자 생산방법
Method for generating xenogeneic reconstituted ovary and oocyte in vitro
특허 요약
본 발명은 체외 이종 난소 및 난자 생산방법에 관한 것으로, 이종 포유동물 유래의 원시생식세포 및 생식선 체세포 간의 분화 시간, 배양액, 배양시기 등을 조절하여 체외에서 형성된 난소로부터 체외에서 난자를 생산할 수 있다. 이는 체외 이종 난소 및 난자 생산 기술의 기초 모델로서, 불임 환자 및 저출산 극복에 활용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

이종의 포유동물로부터 유래한 원시생식세포(PGCs) 및 생식선 체세포(gonadal somatic cells)를 얻은 단계;상기 원시생식세포 및 생식선 체세포를 제1 배지에서 응집시키는 단계;상기 응집된 세포를 배양하는 단계;를 포함하고,상기 제1 배지는 GMEM, KSR(KnockOut Serum Replacement), NEAA(non-essential amino acids), 글루타맥스, 피루브산 나트륨, 레티노산 및 Y27632를 포함하고,상기 배양하는 단계는 2단계로 수행되며,제1 배양은 α-MEM, FBS, 아스코르브산, 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민 및 2-메르갑토에탄올(mercaptoethanol)을 포함하는 제2 배지에서 수행되고,제2 배양은 상기 제1 단계 배양물을 StemPro34 SFM, FBS, 아스코르브산, 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민 및 2-메르갑토에탄올(mercaptoethanol)을 포함하는 제3 배지에 옮겨 수행되며,상기 제2 배양에서 제3 배지에 에스트로겐 수용체 길항제가 더 첨가되는 것이고,상기 제2 배양 이후, 여포가 생성되고, 상기 생성된 여포를 분리하여 제4 배지에서 배양하여 난자를 생산하는 단계;를 포함하며,상기 제4 배지는 α-MEM, BSA(Bovine Serum albumin), 인슐린, 트랜스페린, 셀레늄 및 FSH(Follicle-Stimulating Hormone)을 포함하는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.

2

청구항 1에 있어서, 상기 포유동물은 생쥐(mouse) 및 쥐(rat)인, 체외 이종 난자 생산방법.

3

청구항 1에 있어서, 상기 응집은 1일 내지 5일 동안 수행되는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.

4

청구항 1에 있어서, 상기 제1 및 제2 배양은 10일 내지 20일 동안 수행되는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.

5

청구항 1에 있어서, 상기 제1 배양은 2일 내지 5일 동안 수행되는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.

6

청구항 1에 있어서, 상기 제2 배양은 8일 내지 15일 동안 수행되는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.

7

청구항 1에 있어서, 상기 에스트로겐 수용체 길항제는 제2 배양 기간 중 2일 내지 7일 동안 첨가되는 것인 체외 이종 난자 생산방법.

8

삭제

9

삭제

10

청구항 1에 있어서, 상기 난자 생산단계는 10일 내지 15일 동안 수행되는 것인, 체외 이종 난자 생산방법.