실리카 코팅 자성 비드를 이용한 바이러스 RNA 추출용 조성물 및 이를 이용한 바이러스 RNA 추출 방법
Composition for extracting viral RNA using silica-coated magnetic beads and method for extracting viral RNA using the same
특허 요약
본 발명은 실리카 코팅 자성 비드를 이용한 바이러스 RNA 추출 방법에 관한 것으로, 시료로부터 다양한 오염원을 효과적으로 제거하므로, 더욱 민감하게 시료 유래 바이러스의 진단을 가능하게 하며, 기존 RNA 추출용 조성물에 비하여 저렴한 시약을 사용하기 때문에 비용문제로 샘플을 풀링(pooling) 하는 단계를 생략함으로 써 정밀한 바이러스 발생 감시를 가능하게 할 뿐만 아니라 질병을 매개하는 바이러스 진단 실험 및 다양한 감시 사업의 규모를 더욱 확대할 수 있고 그에 따라 공중보건에 기여할 수 있다.
청구항
번호청구항
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하기의 단계를 포함하는 곤충류 시료로부터 바이러스 RNA 추출 방법:균질화 용액 총량에 대하여 1 내지 30 mM의 EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 및 0.1 내지 2.0 %(w/v)의 NaCl (sodium chloride)을 포함하는 균질화 용액을 첨가하여 시료를 균질화하는 균질화 단계;균질화된 시료에 0.1 내지 1.5 M의 NaCl 및 0.1 내지 10.0 %(v/v)의 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함하는 용해 버퍼를 혼합하는 제1 혼합 단계;균질화된 시료를 원심분리하는 원심분리 단계; 원심분리 상층액에 이소프로판올(isopropanol)을 혼합하는 제2 혼합 단계;실리카 코팅 자성 비드에 상층액을 접촉시키는 바인딩 단계;실리카 코팅 자성 비드를 0.1 내지 5.0 M의 NaCl을 포함하는 1차 세척 버퍼로 세척하는 1차 세척단계; 실리카 코딩 자성 비드를 60 내지 80%(v/v)의 에탄올 수용액을 포함하는 2차 세척 버퍼로 세척하는 2차 세척 단계; 및RNA를 용출시키는 용출 단계.

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제1항에 있어서, 상기 제1 혼합 단계는 1 내지 10 M의 NaCl 수용액을 첨가하여 혼합하는 단계를 추가적으로 포함하는 것인, 바이러스 RNA를 추출하는 방법.

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다음을 포함하는 곤충류 시료로부터 바이러스 RNA 추출용 조성물:(a) 1 내지 30 mM의 EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 및 0.1 내지 2.0 %(v/v)의 NaCl (sodium chloride)을 포함하는 균질화 용액;(b) 0.1 내지 1.5 M의 NaCl 및 0.1 내지 10.0 %(v/v)의 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함하는 용해 버퍼;(c) 0.1 내지 5.0 M의 NaCl(sodium chloride)을 포함하는 1차 세척 버퍼; (d) 60 내지 90 %(v/v)의 에탄올 수용액을 포함하는 2차 세척 버퍼; 및(e) 실리카 코팅 자성 비드.

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