항-TNFα scFv를 발현하는 재조합 균주 및 이를 포함하는 장 질환의 예방 또는 치료용 조성물
Recombinant strains expressing anti-TNFα scFv and compositions for preventing or treating intestinal diseases comprising the same
특허 요약
본 발명은 항-TNFα scFv 발현용 유전자 구조체가 도입된 효모 균주에 관한 것으로, 구체적으로는 항-TNFα scFv의 발현을 최적화시키기 위하여 프로모터, 신호 펩타이드 및 앵커링 모티프를 포함하는 유전자 구조체를 선별하였고, 상기 유전자 구조체를 활용하는 경우 상기 균주에서 항-TNFα scFv의 발현이 향상됨을 확인하였다. 상기 균주는 항염증 효과 및 장 건강 기능 개선 효과를 가지므로 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 프로바이오틱스 소재로 널리 활용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

프로모터를 코딩하는 염기서열;SED1 신호 펩타이드(signal peptide)를 코딩하는 염기서열;scFv를 코딩하는 염기서열; 및 앵커링 모티프(anchoring motif)를 코딩하는 염기서열을 포함하는, 항-TNFα scFv 발현용 유전자 구조체.

2

제1항에 있어서, 상기 프로모터는 PPGK, PGPD, PTEF1 및 PtHXT7로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

3

제1항에 있어서, 상기 SED1 신호 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

4

제1항에 있어서, 상기 항-TNFα scFv는 scFvTSA2 또는 scFvBMEL인 것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

5

제4항에 있어서, 상기 scFvTSA2는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 것이고, 상기 scFvBMEL는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

6

제1항에 있어서, 상기 앵커링 모티프는 DAN4 GPI 도메인인것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

7

제6항에 있어서, 상기 DAN4 GPI 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 유전자 구조체.

8

제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항-TNFα scFv 발현용 유전자 구조체를 포함하는 재조합 플라스미드.

9

항-TNFα scFv 발현용 효모 균주로서,제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항-TNFα scFv 발현용 유전자 구조체가 상기 균주의 유전체 상에 CRISPR/Cas9 시스템으로 도입된 것인, 항-TNFα scFv 발현용 효모 균주.

10

제9항에 있어서, 상기 항-TNFα scFv 발현용 유전자 구조체는 상기 균주의 7번 염색체의 CS6 유전자좌(gene locus) 내로 도입된 것인, 효모 균주.

11

제9항에 있어서,상기 효모 균주는 사카로마이세스 보울라디(Saccharomyces boulardii) 균주인 것을 특징으로 하는, 효모 균주.

12

제9항 내지 제11항의 중 어느 한 항에 따른 효모 균주를 배양하는 단계를 포함하는, 항-TNFα scFv 생산 방법.

13

제12항에 있어서, 상기 균주는 20°C 내지 40°C에서 20시간 내지 100시간동안 50 rpm 내지 400 rpm의 교반 속도로 배양하는 것을 특징으로 하는, 항-TNFα scFv 생산 방법.

14

제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 효모 균주, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

15

제14항에 있어서, 상기 장 질환은 설사, 장염, 과민성 대장 증후군(Irritable Bowel Syndrome; IBS), 대장염, 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 크론병(Crohn's disease), 염증성 장질환(inflammatory bowel disease; IBD) 또는 대장암(colorectal cancer)인 것을 특징으로 하는, 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

16

제14항에 있어서, 상기 균주를 1 X 108 CFU 내지 1 X 1011 CFU의 농도로 포함하는 것을 특징으로 하는, 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.