인공 동질효소가 도입된 효모 균주 및 이를 이용한 글루타치온의 생산 방법
Yeast strain introduced with a synthetic isoenzyme system and production method of glutathione using the same
특허 요약
본 발명은 tHXT7p 및 GSH1 유전자가 포함된 제1 유전자 컨스트럭트; tHXT7p 및 GSH2 유전자가 포함된 제2 유전자 컨스트럭트; 및 tHXT7p 및 gshF 유전자가 포함된 제3 유전자 컨스트럭트로 이루어진 그룹에서 선택되는 글루타치온 생산용 유전자 컨스트럭트; 상기 글루타치온 생산용 유전자 컨스트럭트를 하나 이상 포함하는 글루타치온 생산용 재조합 발현 벡터; 상기 글루타치온 생산용 재조합 발현 벡터로 형질전환된 효모 균주; 및 상기 효모 균주를 배양하는 단계를 포함하는 글루타치온의 생산 방법에 관한 것으로서, 상기 효모 균주는 인공 동질효소 시스템이 도입됨으로써 현저히 높은 생산 수율로 활성형의 글루타치온을 생산할 수 있어, 글루타치온과 관련된 식품 및 제약 산업 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

글루타치온 생산용 재조합 발현 벡터로 형질전환된 효모 균주로서,상기 재조합 발현 벡터는 절단된 HXT7 프로모터(tHXT7p) 및 GSH1(γ-glutamylcysteine synthetase) 유전자가 포함된 제1 유전자 컨스트럭트; tHXT7p 및 GSH2(glutathione synthetase) 유전자가 포함된 제2 유전자 컨스트럭트; 및 tHXT7p 및 gshF 유전자가 포함된 제3 유전자 컨스트럭트로 이루어진 글루타치온 생산용 유전자 컨스트럭트를 포함하고,상기 효모 균주는 groL 유전자가 포함된 유전자 컨스트럭트를 포함하는 재조합 발현 벡터; 및 groS 유전자가 포함된 유전자 컨스트럭트를 포함하는 재조합 발현 벡터로 추가로 더 형질전환된 것인, 효모 균주.

2

제 1 항에 있어서, 상기 tHXT7p는 서열번호 1의 핵산 서열을 포함하는 것인, 효모 균주.

3

제 1 항에 있어서, 상기 GSH1 유전자는 서열번호 10의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인, 효모 균주.

4

제 1 항에 있어서, 상기 GSH2 유전자는 서열번호 11의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인, 효모 균주.

5

제 1 항에 있어서, 상기 gshF 유전자는 서열번호 12 내지 서열번호 14로 이루어진 그룹에서 선택되는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인, 효모 균주.

6

삭제

7

제 1 항에 있어서, 상기 재조합 발현 벡터는 플라스미드 벡터, 코스미드 벡터, 박테리아 인공 염색체(BAC) 벡터, 효모 인공 염색체(YAC) 및 효모 플라스미드 벡터(YIP)로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인, 효모 균주.

8

삭제

9

제 1 항에 있어서, 상기 효모 균주는 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 균주인 것인, 효모 균주.

10

삭제

11

제 1 항에 있어서, 상기 groL 유전자는 서열번호 15의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함하고, 상기 groS 유전자는 서열번호 16의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인, 효모 균주.

12

제 1 항에 있어서, 상기 효모 균주는 수탁번호 KCCM13231P로 기탁된 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 균주인 것인, 효모 균주.

13

제 1 항 내지 제 5 항, 제 7 항, 제 9 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 효모 균주를 배양하는 단계를 포함하는 글루타치온의 생산 방법.

14

제 13 항에 있어서, 상기 배양은 회분식 배양(batch culture), 유가식 배양(fed-batch culture) 및 연속식 배양(continuous culture)으로 이루어진 그룹에서 선택되는 방법으로 배양하는 것인, 생산 방법.

15

제 13 항에 있어서, 상기 글루타치온은 총 글루타치온을 기준으로 활성형의 글루타치온(GSH)을 80% 이상의 양으로 포함하는 것인, 생산 방법.

16

제 13 항에 있어서, 상기 방법은 상기 배양된 효모 균주, 상기 효모 균주의 건조물, 상기 효모 균주의 추출물, 상기 효모 균주의 배양액 및 상기 효모 균주의 파쇄물에서 선택된 하나 이상으로부터 글루타치온을 회수하는 단계를 추가로 더 포함하는 것인, 생산 방법.