뇌척수염 동물 모델과 그 제조방법 및 이를 이용한 뇌척수염 치료제의 스크리닝 방법
Encephalomyelitis model mice, preparation method thereof, and screening method of therapeutic agent against encephalomyelitis using them
특허 요약
본 발명은 뇌척수염 동물 모델과 그 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 뇌척수염 동물 모델은 혈관내피세포 특이적으로 Crif1(CR6-interacting factor 1) 유전자가 결손 된 마우스로, 마우스의 혈관뇌장벽을 구성하는 혈관내피세포의 미토콘드리아 이상을 유도하여 혈관내피세포의 이상 및 혈관내피세포 간의 밀착연접(tight junction)을 감소시킴으로써 혈관뇌장벽의 붕괴를 일으켜 뇌척수염 증상이 나타나도록 하였다. 또한, 본 발명의 뇌척수염 동물 모델을 이용하여 뇌척수염 치료제를 스크리닝 하는 방법을 제공한다. 이에 따라, 본 발명의 뇌척수염 동물 모델은 뇌척수염의 병리학적 기전 연구에 유용하게 이용될 수 있으며 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝에 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
청구항
번호청구항
1

Crif1(CR6-interacting factor 1)의 2번 엑손 양 옆에 loxp site를 삽입한 Crif1loxp/loxp 마우스와 혈관뇌장벽의 혈관내피세포에서 특이적으로 Cre-재조합효소(recombinase)를 발현하는 Tek-Cre 마우스를 교배하여 Crif1loxp/+, Tek-Cre m/+의 유전자형을 갖는 1세대의 Crif1 이형접합 결손(heterozygous knockout) 마우스를 얻는 단계;상기 이형접합 결손 마우스와 Crif1loxp/loxp 마우스를 교배하여 2세대 마우스를 얻는 단계; 및상기 2세대 마우스로부터 Crif1loxp/loxp, Tek-Cre m/+의 유전자형을 가지는 Crif1 동형접합 결손(homozygous knockout) 마우스를 선별하는 단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 동물 모델의 제조 방법.

2

상기 제1항의 제조 방법으로 제조된 혈관뇌장벽의 혈관내피세포에 특이적으로 Crif1(CR6-interacting factor 1) 유전자가 결손(knockout)된 마우스인 것을 특징으로 하는 뇌척수염 동물 모델.

3

제2항에 있어서, 상기 마우스는 동형접합체(homozygote)인 것을 특징으로 하는 뇌척수염 동물 모델.

4

제2항 또는 제3항의 뇌척수염 동물 모델에 시료를 투여하는 단계;시료 투여 후 상기 동물 모델의 혈관뇌장벽의 붕괴를 측정하는 단계; 및상기 시료를 투여하지 않은 대조군과 비교하여 혈관뇌장벽의 붕괴를 억제시키는 시료를 선별하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝 방법.

5

제4항에 있어서, 상기 혈관뇌장벽의 붕괴는 혈관뇌장벽을 이루고 있는 혈관내피세포의 이상 및 밀착연접의 감소를 나타내는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝 방법.

6

제2항 또는 제3항의 뇌척수염 동물 모델에 시료를 투여하는 단계;시료 투여 후 상기 동물 모델의 희소돌기신경교 감소를 측정하는 단계; 및 상기 시료를 투여하지 않은 대조군과 비교하여 희소돌기신경교의 감소를 억제시키는 시료를 선별하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝 방법.

7

제2항 또는 제3항의 뇌척수염 동물 모델에 시료를 투여하는 단계;시료 투여 후 상기 동물 모델의 뇌척수염 관련 증상을 측정하는 단계; 및상기 시료를 투여하지 않은 대조군과 비교하여 뇌척수염 관련 증상을 억제시키는 시료를 선별하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝 방법.

8

제7항에 있어서, 상기 뇌척수염 관련 증상은 동물 모델의 뒷다리 마비, 앞다리 및 뒷다리의 마비 및 사망으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 증상을 나타내는 것을 특징으로 하는 뇌척수염 예방 및 치료제의 스크리닝 방법.