플라스미드 기반의 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제시스템
Plasmid-based Vibrio cholerae CTX phage replication system
특허 요약
본 발명은 플라스미드 기반의 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제시스템에 관한 것으로, CTX 파지 게놈 서열을 복제 가능한 유닛으로 플라스미드에 클로닝시킨 후 이를 숙주세포에서 증폭하고 비브리오 콜레라 균주에 넣어주면 숙주 바이오타입에 관계없이 CTX 파지의 복제가 가능하다. 또한, 본 발명의 플라스미드를 이용하여 하나의 비브리오 콜레라 숙주 세포에 다양한 복수의 CTX 파지를 모두 가지는 균주 제작이 가능하다.
청구항
번호청구항
1

SEQ ID NO: 1에 기재된 ctxA 유전자 전장 서열 및 SEQ ID NO: 2에 기재된 ctxB 유전자의 전장 서열 또는 이의 단편이 선별 마커 유전자로 치환된 비브리오 콜레라 CTX 파지 게놈 서열이 플라스미드의 복제 기점(replication origin)에 연결되어 있는, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

2

제1항에 있어서,상기 ctxB 유전자의 단편은 SEQ ID NO: 3에 기재된 염기서열을 포함하는, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

3

제1항에 있어서,상기 비브리오 콜레라 CTX 파지 게놈 서열은 CTX-1, CTX-cla, CTX-2, CTX-env 또는 CTX-O139중 어느 하나의 게놈 서열인, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

4

제1항에 있어서,상기 선별 마커 유전자는 암피실린 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 스트랩토마이신 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자, 에리트로마이신 내성 유전자 및 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제 유전자로 이루어진 군에서 선택되는, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

5

제1항에 있어서,상기 선별 마커 유전자는 SEQ ID NO: 4에 기재된 염기서열을 포함하는, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

6

제1항에 있어서,상기 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드는 pUC19, pUC18, pBR322, pHSG299, pHSG298, pHSG399, pHSG398, RSF1010, pMW119, pMW118, pMW219 및 pMW218로 이루어진 군에서 선택된 대장균 유래 형질전환용 플라스미드 유래인, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

7

삭제

8

제1항에 있어서, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드는 도 4B의 pUC-CTX-kan의 개열지도를 갖는 것인, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

9

제1항에 있어서,상기 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드는 대장균(E. coli), 살모넬라(Samonella), 시겔라(Shigella), 클렙시엘라(Klebsiella), 슈도모나스(Psuedomonas) 및 비브리오(Vibrio)에서 복제 가능한 것인, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

10

제1항에 있어서,상기 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드는 classical 바이오타입, E1 Tor 바이오타입, atypical E1 Tor 바이오타입 또는 O139 바이오타입의 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae)에서 복제 가능한 것인, 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드.

11

제1항의 비브리오 콜레라 CTX 파지 복제용 재조합 플라스미드로 형질전환된 미생물.

12

제11항에 있어서,상기 미생물이 대장균(E. coli), 살모넬라(Samonella), 시겔라(Shigella), 클렙시엘라(Klebsiella), 슈도모나스(Psuedomonas), 및 비브리오(Vibrio)로 이루어진 군에서 선택되는, 미생물.

13

제11항의 형질전환된 미생물을 배양하는 단계; 및상기 형질전환된 미생물의 배양액에서 비브리오 콜레라 CTX 파지를 분리 정제하는 단계를 포함하는 비브리오 콜레라 CTX 파지의 생산 방법.