안트라닐레이트 고생산 재조합 대장균 균주 및 이의 용도
Recombinant E.coli strains for high production of anthranilate and uses thereof
특허 요약
본 발명은 안트라닐레이트(anthranilate) 고생산 재조합 대장균 균주 및 이의 용도에 대한 것으로, 본 발명에서는 선행연구를 통해 기확보된 시키메이트(shikimate) 고생산 E. coli 재조합 균주를 기반으로, 제거된 두 개의 shikimate kinase 유전자 (aroL 및 aroK)를 보상하고 안트라닐레이트에 phophoribosyl group을 전이하는 trpD 유전자를 제거함으로써 안트라닐레이트가 축적되도록 하였다. 또한 안트라닐레이트 생합성 과정에서 기질로 사용되는 chorismate의 대사경로를 억제함으로써 시키메이트의 과축적을 유도하였고, trpR 유전자의 제거 및 dehydroshikimate로부터 시키메이트로의 생전환에 관여하는 shikimate dehydrogenase (aroE gene)의 안정적인 발현, 그리고 transketolase의 과발현을 통해 시키메이트 경로 및 탄소 대사 경로 최적화를 시도하였다. 이렇게 구축된 안트라닐레이트 고생산 균주의 7 L 유가식 배양(fed-batch fermentation)을 통해 약 18.1 g/L의 안트라닐레이트가 생산되는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 현재까지 보고된 미생물 기반의 안트라닐레이트 생산 수율 중 가장 높은 수치로 확인되었다. 본 발명을 통해 구축한 rational cell factory design 전략은...(이하생략)
청구항
| 번호 | 청구항 |
|---|---|
| 1 | 시키메이트(shikimate) 고생산 균주에 aroL 및 aroK 유전자를 과발현시키고, trpD, pheA, tyrA, pabA, entC 및 ubiC 유전자를 결실시킨, 안트라닐레이트(anthranilate) 고생산 재조합 대장균 균주. |
| 2 | 제1항에 있어서, 상기 시키메이트(shikimate) 고생산 균주는 E. coli AB2834 균주에 aroB, aroD, aroF, aroG, galP, ppsA, aroE 및 tktA 유전자를 과발현시키고, tyrR, ptsG, pykA, aroL, aroK 및 shiA 유전자를 결실시킨 것을 특징으로 하는 안트라닐레이트(anthranilate) 고생산 재조합 대장균 균주. |
| 3 | 제1항에 따른 균주의 유전체(chromosome)에 aroE 유전자를 삽입하고, trpR 유전자를 결실시키고, tktA 유전자는 J23119 프로모터의 조절 하에서 과발현시키고, aroL 및 aroK 유전자는 종결코돈과 개시코돈이 결합된 형태로 치환시킨, 안트라닐레이트(anthranilate) 고생산 재조합 대장균 균주. |
| 4 | 제3항에 있어서, 상기 재조합 대장균 균주는 수탁번호 KCTC19060P로 기탁된 균주인 것을 특징으로 하는 안트라닐레이트(anthranilate) 고생산 재조합 대장균 균주. |
| 5 | 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 재조합 대장균 균주를 배양하는 단계를 포함하는 안트라닐레이트(anthranilate) 생산 방법. |
