세포 배양용 지지섬유-기반 다층 구조 3D 지지체 및 이의 용도
Multi-layer 3D Scaffold Based on Supported Fibrous for Cell Culture and Uses Thereof
특허 요약
본 발명은 세포 배양용 지지섬유-기반 다층 구조 3D 지지체 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, in vitro 실험모델로 적용하기에 보다 적합하도록 종양 조직의 대표적인 환경인 저산소 환경을 구축하여 세포의 형상/구조를 실제 체내와 유사하게 배양할 수 있어, 실제 조직과 유사한 밀집된 형태의 3 차원 생체 모사 배양 시스템을 입체적형상으로 용이하게 구현하므로, 암 치료제의 효능 평가를 위한 동물 실험을 대체할 수 있다.
청구항
번호청구항
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4개의 30 ㎛ 두께 PCL(polycaprolactone)-단층이 적층된 PCL-다층에 의해 형성된 3차원 네트워크 구조의 섬유웹을 포함하는, 저산소 환경하에서의 암세포 배양용 3차원 지지체로서,상기 PCL-단층은 각 단층 간 간극을 갖지 않으며;상기 섬유웹은 세포 배양 배지와 접촉하는 표면으로부터 두께 70 ㎛ 내지 120 ㎛ 이격된 위치에서 저산소 환경이 조성되고;상기 저산소 환경 하에서 배양된 암은 항암제 또는 방사선에 저항성을 가지며;상기 저산소 환경은 Glut1 (Glucose transporter 1), Ca9 (Carbonic anhydrase IX), VEGF (vascular endothelial growth factor) 및 LDHA (Lactate dehydrogenase A)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 HIF 표적 유전자의 발현 수준이 증가되는 것을 특징으로 하는, 저산소 환경하에서의 암세포 배양용 3 차원 지지체.

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4개의 30 ㎛ 두께 PCL(polycaprolactone)-단층이 적층된 PCL-다층에 의해 형성된 3차원 네트워크 구조의 섬유웹을 포함하는, 저산소 환경하에서의 암세포 배양용 3차원 지지체부; 및 상기 지지체부에서 세포 배양 배지와 접촉하는 표면으로부터 두께 70 ㎛ 내지 120 ㎛ 이격된 위치에 형성된 저산소 환경하에 존재하는 암세포;를 포함하는, 저산소 환경-모사 암세포 배양 시스템으로서,상기 PCL-단층은 각 단층 간 간극을 갖지 않으며;상기 세포 배양 배지와 접촉하는 표면으로부터 두께 70 ㎛ 내지 120 ㎛ 이격된 위치에 형성된 저산소 환경 하에서 배양된 암은 항암제 또는 방사선에 저항성을 가지며;상기 저산소 환경은 Glut1 (Glucose transporter 1), Ca9 (Carbonic anhydrase IX), VEGF (vascular endothelial growth factor) 및 LDHA (Lactate dehydrogenase A)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 HIF 표적 유전자의 발현 수준이 증가되는 것을 특징으로 하는,저산소 환경-모사 암세포 배양 시스템.

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(a) 30 ㎛ 두께 PCL(polycaprolactone)-단층에 암세포를 배양하여 부착시키는 단계; 및(b) 상기 (a) 단계의 암세포가 부착된 PCL-단층을 4개 적층하여 다층 구조 3D 지지체를 제작하는 단계;를 포함하는, 저산소 환경-모사 암세포 배양 시스템 제조 방법으로서,상기 (a) 단계의 PCL-단층은 각 단층 간 간극을 갖지 않으며;상기 (b) 단계의 지지체는 세포 배양 배지와 접촉하는 표면으로부터 두께 70 ㎛ 내지 120 ㎛ 이격된 위치에서 저산소 환경이 형성되고;상기 세포 배양 배지와 접촉하는 표면으로부터 두께 70 ㎛ 내지 120 ㎛ 이격된 위치에 형성된 저산소 환경 하에서 배양된 암은 항암제 또는 방사선에 저항성을 가지며;상기 저산소 환경은 Glut1 (Glucose transporter 1), Ca9 (Carbonic anhydrase IX), VEGF (vascular endothelial growth factor) 및 LDHA (Lactate dehydrogenase A)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 HIF 표적 유전자의 발현 수준이 증가되는 것을 특징으로 하는,저산소 환경-모사 암세포 배양 시스템 제조 방법.

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다음 단계를 포함하는 암세포에 대한 치료 효능 평가를 위한 정보 제공 방법:(a) 제1항의 저산소 환경하에서의 세포 배양용 3차원 지지체에서 암세포를 배양하는 단계;(b) 상기 (a) 단계의 암세포에 목적의 암 치료제 또는 치료제 후보 물질을 처리하는 단계; 및(c) 상기 (b) 단계의 암세포에서 암과 상관 관계가 있는 지표 값을 측정하는 단계.