역미셀계를 이용한 리폭시제나아제 활성 측정방법
Method for the spectrometric assay of lipoxygenase in reversed micellar system
특허 요약
본 발명은 신규의 리폭시제나아제(lipoxygenase) 활성 측정 방법에 관한 것으로, 흡광도 측정시 공액디엔(conjugated diene)의 검출을 간섭하는 계면활성제를 에탄올을 이용하여 효과적으로 제거할 수 있기 때문에, 조효액으로부터 리폭시제나아제의 활성을 오차없이 정확하게 측정할 수 있다.
청구항
번호청구항
1

기질인 알파-리놀레산(α-linoleic acid), 계면활성제 및 리폭시제나아제(lipoxygenase)를 함유하는 샘플을 비극성 용매에 혼합하여 역미셀(reverse micelle) 형성 및 효소 반응을 유도하는 단계 (a);상기 단계 (a)의 효소 반응 후, 반응액에 30%(v/v) 에탄올을 추가로 첨가하여 혼합하고, 원심분리하는 단계 (b); 및상기 단계 (b)의 원심분리 후, 상층액을 채취하여 흡광도를 측정하는 단계(c); 를 포함하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

2

제1항에 있어서,상기 단계 (a)는, 리폭시제나아제(lipoxygenase)를 함유하는 샘플 및 계면활성제를 비극성 용매에 먼저 첨가한 후, 혼합시켜 역미셀을 형성시킨 후, 나중에 기질인 알파-리놀레산(α-linoleic acid)을 첨가하여 효소 반응을 유도하는 것을 특징으로 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

3

제1항에 있어서, 상기 비극성 용매는, 이소옥탄(isooctane)인 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

4

제1항에 있어서,상기 계면활성제는,소듐 디옥틸 설포숙시네이트(sodium dioctyl sulfosuccinate, AOT)인 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

5

제1항에 있어서,상기 단계 (a)의 혼합은, 볼텍스 믹서(vortex mixer)를 통해 수행하는 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

6

제1항에 있어서,상기 단계 (b)의 혼합은, 볼텍스 믹서(vortex mixer)를 통해 수행하는 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

7

제1항에 있어서,리폭시제나아제(lipoxygenase)를 함유하는 샘플은,리폭시제나아제(lipoxygenase)를 함유하는 식물로부터 유래한 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

8

제1항에 있어서,상기 단계 (c)의 흡광도는,234 nm에서 측정하는 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.

9

제1항에 있어서, 상기 단계 (b)는,에탄올 첨가 전에, 반응액에 단계 (a)의 비극성 용매를 추가로 첨가하여 혼합시키는 과정을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 리폭시제나아제의 활성 측정 방법.