알파코로나바이러스 검출용 프라이머 세트 및 이의 용도
PRIMER SETS FOR DETECTING ALPHACORONAVIRUS AND USES THEROF
특허 요약
본 발명은 알파코로나바이러스의 검출을 위한 프라이머 세트를 이용한 신규한 알파코로나바이러스의 검출 및 전장 유전체 서열 획득 방법에 관한 것으로, 본 발명에서는 설치류 유래 인수공통 알파코로나바이러스 종을 환자 및 자연 숙주동물에서 확인하였으며, 분리한 알파코로나바이러스의 전장 유전체 염기서열을 분석하여 특성화하고, 이를 검출/진단하기 위한 프라이머 세트들을 설계하였으며, 이를 이용하여 기존에 개발된 진단법의 단점이 보완된 다중 PCR-기반 차세대염기서열분석법(Multiplex PCR-based NGS)으로 본 발명에서 확인된 바이러스 종이 종래에 알려지지 않은 신규한 인수공통 알파코로나바이러스임을 확인하였으므로, 본 발명의 프라이머 세트를 활용하여 신규한 인수공통 알파코로나바이러스를 검출하고 바이러스 감염원 분석, 역학추적, 바이러스 진화패턴을 분석하거나 이에 의한 감염을 진단할 수 있는 효과가 있다.
청구항
번호청구항
1

하기로 이루어진 군에서 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 알파코로나바이러스의 검출용 프라이머 세트:서열번호 1 및 서열번호 2; 서열번호 3 및 서열번호 4; 서열번호 5 및 서열번호 6; 서열번호 7 및 서열번호 8; 서열번호 9 및 서열번호 10; 서열번호 11 및 서열번호 12; 서열번호 13 및 서열번호 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 서열번호 29 및 서열번호 30; 서열번호 31 및 서열번호 32; 서열번호 33 및 서열번호 34; 서열번호 35 및 서열번호 36; 서열번호 37 및 서열번호 38; 서열번호 39 및 서열번호 40; 서열번호 41 및 서열번호 42; 서열번호 43 및 서열번호 44; 서열번호 45 및 서열번호 46; 서열번호 47 및 서열번호 48; 서열번호 49 및 서열번호 50; 서열번호 51 및 서열번호 52; 서열번호 53 및 서열번호 54; 서열번호 55 및 서열번호 56; 서열번호 57 및 서열번호 58; 서열번호 59 및 서열번호 60; 서열번호 61 및 서열번호 62; 서열번호 63 및 서열번호 64; 서열번호 65 및 서열번호 66; 서열번호 67 및 서열번호 68; 서열번호 69 및 서열번호 70; 서열번호 71 및 서열번호 72; 서열번호 73 및 서열번호 74; 서열번호 75 및 서열번호 76; 서열번호 77 및 서열번호 78; 서열번호 79 및 서열번호 80; 서열번호 81 및 서열번호 82; 서열번호 83 및 서열번호 84; 서열번호 85 및 서열번호 86; 서열번호 87 및 서열번호 88; 서열번호 89 및 서열번호 90; 서열번호 91 및 서열번호 92; 서열번호 93 및 서열번호 94; 서열번호 95 및 서열번호 96; 서열번호 97 및 서열번호 98; 서열번호 99 및 서열번호 100; 서열번호 101 및 서열번호 102; 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2

제 1항에 있어서, 상기 프라이머 세트는 알파코로나바이러스의 전장 유전체에 상보적인 알파코로나바이러스의 검출용 프라이머 세트.

3

제 1항에 있어서, 알파코로나바이러스는 Colacovirus, Decacovirus, Duvinacovirus, Luchacovirus, Minacovirus, Minunacovirus, Myotacovirus, Nyctacovirus, Pedacovirus, Rhinacovirus, Setracovirus, Soracovirus, Sunacovirus 또는 Tegacovirus인, 알파코로나바이러스의 검출용 프라이머 세트.

4

제 1항에 있어서, 알파코로나바이러스는 AaCoV, AcCoV-JC34 또는 HCoV KUMC22-3인, 알파코로나바이러스의 검출용 프라이머 세트.

5

제 1항에 있어서, 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction; LCR), Gap-LCR, 복구 연쇄반응(repair chain reaction), 전사-중재 증폭(transcription-mediated amplification; TMA), 자가 유지 염기서열 복제(self sustained sequence replication), 표적 폴리뉴클레오티드 염기서열의 선택적 증폭(selective amplification of target polynucleotide sequences), 컨센서스 서열 프라이밍 PCR(consensus sequence primed PCR; CP-PCR), 임의적 프라이밍 PCR(arbitrarily primed PCR; AP-PCR), 핵산 서열 기반 증폭(nucleic acid sequence based amplification; NASBA), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification), 고리-중재 항온성 증폭(loop-mediated isothermal amplification; LAMP), 다중 PCR(multiplex PCR), 차세대염기서열분석(Next-generation sequencing, NGS), 다중 PCR 기반-차세대염기서열분석(multiplex PCR-based NGS), 나노포어 기반-차세대염기서열분석(nanopore-based NGS), 이중 PCR(nested-PCR), 단일 튜브 이중 PCR(single tube nested-PCR), 역전사-PCR(reverse transcription PCR; RT-PCR), 역 PCR(inverse PCR), 실시간 PCR(real-time PCR), 및 실시간 정량적 PCR(real-time quantitative PCR; RQ-PCR), dPCR(Digital PCR) 또는 TaqMan 기반 실시간 정량 중합효소연쇄반응(TaqMan-based real-time qPCR)용인, 알파코로나바이러스의 검출용 프라이머 세트.

6

제 1항의 프라이머 세트를 포함하는 알파코로나바이러스의 검출용 조성물.

7

하기로 이루어진 군에서 선택되는 프라이머 세트를 포함하는 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석용 프라이머 세트:서열번호 1 및 서열번호 2; 서열번호 3 및 서열번호 4; 서열번호 5 및 서열번호 6; 서열번호 7 및 서열번호 8; 서열번호 9 및 서열번호 10; 서열번호 11 및 서열번호 12; 서열번호 13 및 서열번호 14; 서열번호 15 및 서열번호 16; 서열번호 17 및 서열번호 18; 서열번호 19 및 서열번호 20; 서열번호 21 및 서열번호 22; 서열번호 23 및 서열번호 24; 서열번호 25 및 서열번호 26; 서열번호 27 및 서열번호 28; 서열번호 29 및 서열번호 30; 서열번호 31 및 서열번호 32; 서열번호 33 및 서열번호 34; 서열번호 35 및 서열번호 36; 서열번호 37 및 서열번호 38; 서열번호 39 및 서열번호 40; 서열번호 41 및 서열번호 42; 서열번호 43 및 서열번호 44; 서열번호 45 및 서열번호 46; 서열번호 47 및 서열번호 48; 서열번호 49 및 서열번호 50; 서열번호 51 및 서열번호 52; 서열번호 53 및 서열번호 54; 서열번호 55 및 서열번호 56; 서열번호 57 및 서열번호 58; 서열번호 59 및 서열번호 60; 서열번호 61 및 서열번호 62; 서열번호 63 및 서열번호 64; 서열번호 65 및 서열번호 66; 서열번호 67 및 서열번호 68; 서열번호 69 및 서열번호 70; 서열번호 71 및 서열번호 72; 서열번호 73 및 서열번호 74; 서열번호 75 및 서열번호 76; 서열번호 77 및 서열번호 78; 서열번호 79 및 서열번호 80; 서열번호 81 및 서열번호 82; 서열번호 83 및 서열번호 84; 서열번호 85 및 서열번호 86; 서열번호 87 및 서열번호 88; 서열번호 89 및 서열번호 90; 서열번호 91 및 서열번호 92; 서열번호 93 및 서열번호 94; 서열번호 95 및 서열번호 96; 서열번호 97 및 서열번호 98; 서열번호 99 및 서열번호 100; 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8

제 7항에 있어서, 알파코로나바이러스는 AaCoV, AcCoV-JC34 또는 HCoV KUMC22-3인, 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석용 프라이머 세트.

9

제 7항에 있어서, 차세대염기서열분석(Next-generation sequencing, NGS), 다중 PCR 기반-차세대염기서열분석(multiplex PCR-based NGS) 또는 나노포어 기반-차세대염기서열분석(nanopore-based NGS)용인, 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석용 프라이머 세트.

10

제 7항의 프라이머 세트를 포함하는 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석용 조성물.

11

제 1항의 프라이머 세트; 및 중합효소연쇄반응에 필요한 시약을 포함하는, 알파코로나바이러스 검출 또는 감염 진단 키트.

12

제 11항에 있어서, 중합효소연쇄반응에 필요한 시약은 dNTP, DNA 중합효소 및 완충액인, 알파코로나바이러스 검출 또는 감염 진단 키트.

13

(a) 검체로부터 채취한 시료에서 RNA를 추출하는 단계;(b) cDNA를 합성하는 단계;(c) 제 7항의 프라이머 세트를 이용하여 다중 PCR(multiplex PCR)을 수행하는 단계; 및(d) 차세대염기서열분석을 수행하는 단계를 포함하는, 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석 방법.

14

제 13항에 있어서, 차세대염기서열분석은 다중 PCR 기반-차세대염기서열분석 또는 나노포어 기반-차세대염기서열분석인, 알파코로나바이러스의 전장 유전체 분석 방법.