3세대 염기서열분석 기반 한탄바이러스 검출 방법
Detection method of Hantaan virus based Third-generation sequencing
특허 요약
본 발명은 3세대 염기서열분석법인 나노포어 시퀀싱을 이용한 한탄바이러스 검출 방법에 관한 것으로, 본 발명의 방법은 기존 차세대염기서열분석법에 비해 상대적으로 저렴한 비용으로 신속하게 (2시간 이내) 고품질의 바이러스 유전자 염기서열을 확보할 수 있으므로, 기존에 개발된 진단법의 단점을 보완할 수 있고, 한탄바이러스의 감염에 의한 질환의 진단에 사용될 수 있을뿐 아니라, 전장의 유전체 서열을 확보할 수 있어, 추후 바이러스 감염원 및 감염지역 역학추적, 병원성 분석, 진화율 및 진화패턴 분석 등을 위한 기초 연구자료로도 활용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

서열번호 1로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 2로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 3로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 5로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 8로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 9로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 10으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 11로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 12로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 13으로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 14로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 15로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 16으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 17로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 18로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 19로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 20으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 21로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 22로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 23으로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 24로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 및 서열번호 25로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 26으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머;를 포함하며, 2시간 이내에 한탄바이러스 전장 유전체 염기서열을 확보할 수 있는 것을 특징으로 하는, 단일 단계 역전사-중합효소연쇄반응(One-step RT-PCR) 수행을 위한 한탄바이러스(Hantaan virus, HTNV) 검출용 프라이머 세트.

2

삭제

3

삭제

4

서열번호 1로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 2로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 3로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 5로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 8로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 9로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 10으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 11로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 12로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 13으로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 14로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 15로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 16으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 17로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 18로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 19로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 20으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 21로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 22로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 서열번호 23으로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 24로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머, 및 서열번호 25로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 26으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머;를 포함하며, 2시간 이내에 한탄바이러스 전장 유전체 염기서열을 확보할 수 있는 것을 특징으로 하는, 단일 단계 역전사-중합효소연쇄반응(One-step RT-PCR) 수행을 위한 한탄바이러스의 전장 유전체 서열 확인용 다중 프라이머 세트.

5

삭제

6

제 4항에 있어서, 프라이머 세트는 나노포어 염기서열분석에 사용하기 위한 것인, 한탄바이러스의 전장 유전체 서열 확인용 다중 프라이머 세트.

7

제 1항의 프라이머 세트를 포함하는 한탄바이러스 검출용 조성물.

8

제 7항의 조성물을 포함하는 한탄바이러스 검출용 키트.

9

제 1항의 프라이머 세트를 포함하는 한탄바이러스 감염 질환 진단용 조성물.

10

제 9항에 있어서, 한탄바이러스 감염 질환은 신증후군출혈열(Hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS) 또는 한타바이러스 폐증후군(Hantavirus pulmonary syndrome, HPS)인, 한탄바이러스 감염 질환 진단용 조성물.

11

제 9항의 조성물을 포함하는 한탄바이러스 감염 질환 진단 키트.

12

(a) 검체로부터 채취한 시료에서 핵산을 추출하는 단계;(b) 제 1항의 프라이머 세트를 이용하여 단일 단계 역전사-중합효소연쇄반응(One-step RT-PCR)을 수행하는 단계; (c) 라이브러리를 제작하는 단계; 및(d) 나노포어 염기서열분석을 수행하는 단계를 포함하는, 한탄바이러스 검출 방법.

13

제 12항에 있어서, 롱-리드(long-read) 서열분석 기술이 적용되는, 한탄바이러스 검출 방법.

14

삭제

15

삭제

16

제 12항에 있어서, 라이브러리는 1 내지 1.5kb 단위의 라이브러리인, 한탄바이러스 검출 방법.

17

(a) 검체로부터 채취한 시료에서 RNA를 추출하는 단계;(b) 제 4항의 프라이머 세트를 이용하여 단일 단계 역전사-중합효소연쇄반응을 수행하는 단계; (c) 라이브러리를 제작하는 단계; 및(d) 롱-리드(long-read) 나노포어 염기서열분석을 수행하는 단계를 포함하는, 한탄바이러스의 전장 유전체 서열 확인 방법.

18

제 17항에 있어서, 라이브러리는 1 내지 1.5kb 단위의 라이브러리인, 한탄바이러스의 전장 유전체 서열 확인 방법.