만성 상기도 염증성질환 모델용 3차원 하이브리드 세포배양시스템
3D hybrid cell culture system for chronic upper upper respiratory inflammatory disease model
특허 요약
본 발명은 만성 상기도 염증성 질환의 모델링을 위한 3D 하이브리드 세포 배양시스템에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 비강 상피세포를 ALI 배양하고, 비강 섬유아세포를 3D 스페로이드 배양한 후 두 세포집합체를 공배양하여 얻어지는 하이브리드 세포 배양시스템에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 염증세포 등의 추가로 상기도 염증성 질환을 구현할 수 있어 질환 모델링 및 약물 스크리닝에 효과적으로 이용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

비강 상피세포를 공기-액체 계면에서 배양하는 제1층; 및상기 제1층 하부에 위치하며, 비강 섬유아세포를 기질 내에서 스페로이드 형태로 배양하는 제2층; 을 포함하며, 상기 제2층에 염증세포가 첨가되는 것을 특징으로 하는, 호산구성 만성 비부비동염 모델용 3차원 하이브리드 세포 배양시스템으로서, 상기 염증세포는 EOL-1이고, 상기 제2층의 배양은 RPMI 1640 배지를 이용하여 수행되는 것인, 3차원 하이브리드 배양시스템.

2

제 1항에 있어서, 상기 3차원 하이브리드 세포 배양시스템은 호산구성 만성 비부비동염의 내재형 및 조직학적 특징을 발현하는 것인, 3차원 하이브리드 세포 배양시스템.

3

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4

제 1항에 있어서, 상기 제2층의 상기 기질은 마트리겔인, 3차원 하이브리드 세포 배양시스템.

5

제 4항에 있어서, 상기 제2층 기질의 조성은 DMEM, 10%(v/v) 소태아혈청(FBS) 및 1%(v/v) p/s(penicillin/streptomycin)으로 구성되는, 3차원 하이브리드 세포 배양시스템.

6

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7

(a) 대상체의 비강으로부터 비강 상피세포와 비강 섬유아세포를 수득하는 단계;(b) 상기 비강 상피세포를 공기-액체 계면상(Air-liquid interface)에서 2차원 배양하는 단계;(c) 상기 비강 섬유아세포를 기질내에서 스페로이드 형태로 3차원 배양하는 단계; 및 (d) 상기 (c) 단계에서 배양된 비강섬유아세포 스페로이드에 염증세포를 추가하여 상기 (b)단계에서 배양된 비강상피 세포의 상부에 적층하고 공배양하는 단계;를 포함하는, 호산구성 만성 비부비동염 모델용 3차원 하이브리드 세포 배양방법으로서, 상기 염증세포는 EOL-1이고, 상기 제2층의 배양은 RPMI 1640 배지를 이용하여 수행되는 것인, 3차원 하이브리드 세포 배양방법.

8

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9

제 7항에 있어서, 상기 (b) 단계는, 상기 비강 상피세포를 분비세포, 섬모세포 및 기저세포로 이루어진 군 중 어느 하나 이상의 세포로 분화시키는 단계를 포함하는, 호산구성 만성 비부비동염 모델용 3차원 하이브리드 세포 배양방법.

10

제 7항에 있어서, 상기 (c) 단계의 상기 기질은 마트리겔인, 호산구성 만성 비부비동염 모델용 3차원 하이브리드 세포 배양방법.

11

제1항, 제 2항, 제 4항 및 제 5항 중 어느 한 항의 호산구성 만성 비부비동염 모델용 3차원 하이브리드 세포 배양시스템를 준비하는 단계; 및 상기 세포 배양시스템에서 배양된 세포에 호산구성 만성 비부비동염 치료제 후보 물질을 접촉시키는 단계; 및상기 후보 물질 중 상기 세포에서의 염증반응을 감소시키는 후보물질을 치료제로 선정하는 단계;를 포함하는 호산구성 만성 비부비동염 치료제 스크리닝 방법.