미토콘드리아 칼슘을 표지할 수 있는 이광자 청색 형광 프로브
Blue-emitting two-photon fluorescent probes for calcium ions in mitochondria
특허 요약
본 발명은 세포내 소기관 특이적 이광자 형광 프로브에 관한 것으로, 보다 상세하게는 세포 내 소기관 중에서도 미토콘드리아를 타겟하여 형광신호를 통해 칼슘 이온(Ca 2+ )을 선택적으로 검출할 수 있는 청색 발광 이광자 프로브, 이의 제조방법과 상기 이광자 프로브를 이용하여 미토콘드리아 내 칼슘 이온을 이미징하는 방법 및 칼슘 이온의 분포 또는 농도의 변화를 모니터링하는 방법에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
1

하기 화학식 1로 표시되는 이광자 형광 프로브 화합물로서,상기 이광자 형광 프로브 화합물은 칼슘 이온(Ca2+)에 특이적으로 결합하고,상기 이광자 형광 프로브 화합물은 미토콘드리아를 타겟하여 미토콘드리아 내 칼슘 이온을 선택적으로 이미징하는 것인, 이광자 형광 프로브 화합물:[화학식 1]상기 화학식 1에서 Y는 K, CH3 또는 CH2OC(O)CH3 이다.

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3

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4

제1항에 있어서, 상기 이광자 형광 프로브 화합물은 칼슘 이온에 대한 형광 반응으로 청색 형광을 방출하는 것인, 이광자 형광 프로브 화합물.

5

제1항에 따른 이광자 형광 프로브 화합물을 포함하는 생체 세포 또는 조직의 칼슘 이온 검출용 이광자 형광 프로브 조성물.

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7

제5항에 있어서, 상기 이미징의 깊이는 90-140㎛인 것인, 칼슘 이온 검출용 이광자 형광 프로브 조성물.

8

제1항에 따른 이광자 형광 프로브 화합물을 생체로부터 분리된 세포 또는 조직에 주입하는 단계;상기 생체로부터 분리된 세포 또는 조직에 여기원(excitation source)을 조사하는 단계; 및이광자 현미경으로 상기 이광자 형광 프로브 화합물로부터 발생하는 형광을 관측하는 단계;를 포함하는, 미토콘드리아 내 칼슘 이온을 선택적으로 이미징하는 방법.

9

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10

하기 화학식 2로 표시되는 화합물과 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시키는 단계를 포함하는, 하기 화학식 1로 표시되는 이광자 형광 프로브 화합물의 제조방법으로서,상기 이광자 형광 프로브 화합물은 칼슘 이온(Ca2+)에 특이적으로 결합하고,상기 이광자 형광 프로브 화합물은 미토콘드리아를 타겟하여 미토콘드리아 내 칼슘 이온을 선택적으로 이미징하는 것인, 이광자 형광 프로브 화합물의 제조방법:[화학식 1][화학식 2][화학식 3]상기 화학식 1, 2 또는 3에서 Y는 K, CH3 또는 CH2OC(O)CH3 이고,X는 H, OH, O(CH2)3Br 또는 O(CH2)3PPH2+Br- 이고,R1은 CO2C(CH3)3 또는 CO2H 이고,Z는 H 또는 F 이고,L은 H 또는 NH2 이다.

11

제10항에 있어서, 상기 화학식 1에서 Y는 K 또는 CH2OC(O)CH3 이고, 화학식 2에서 X는 OH 이고, R1은 CO2H 이고, 화학식 3에서 Y는 CH3 이고, Z는 F 이고, L은 NH2 인 것인, 화학식 1로 표시되는 이광자 형광 프로브 화합물의 제조방법.

12

제10항에 있어서, 상기 화학식 2에서 X가 OH인 경우, 상기 OH를 O(CH2)3Br 또는 O(CH2)3PPH2+Br- 로 치환하는 단계를 더 포함하는 것인, 화학식 1로 표시되는 이광자 형광 프로브 화합물의 제조방법.

13

제10항에 있어서, 상기 화학식 3에서 Y가 CH3 인 경우, 상기 CH3 를 K 또는 CH2OC(O)CH3 으로 치환하는 단계를 더 포함하는 것인, 화학식 1로 표시되는 이광자 형광 프로브 화합물의 제조방법.