A형 간염바이러스의 검출 및 정량 방법
METHOD FOR DETECTION AND QUANTIFICATION OF HEPATITIS A VIRUS
특허 요약
본 발명은 A형 간염바이러스의 검출 및 정량을 위한 프라이머 및 프로브, 및 이를 이용한 A형 간염바이러스의 검출 및 정량 방법에 관한 것으로, 본 발명의 프라이머 및 프로브 세트들은 A형 간염바이러스에서 보존된 유전체 부위인 VP0 유전자, VP3 유전자 및 3C 유전자 부위를 한번에 검출 및 정량할 수 있으므로, TaqMan-기반 실시간 qPCR 방법을 이용하여 극미세소량의 A형 간염바이러스 유전체를 짧은 시간 안에 정확하게 검출 및 정량하여, A형 간염바이러스의 분석 방법의 민감도, 특이도 및 정확도를 높이는 효과가 있다.
청구항
번호청구항
1

서열번호 2로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 3으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머쌍 및 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 포함하는 프로브로 구성된 세트; 서열번호 5로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머쌍 및 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 프로브로 구성된 세트; 및 서열번호 8로 표시되는 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 9로 표시되는 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머로 이루어진 프라이머쌍 및 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는 프로브로 구성된 세트;를 포함하며, A형 간염바이러스(Hepatitis A virus, HAV)의 VP3 유전체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, A형 간염바이러스 검출 또는 정량용 프라이머 및 프로브 세트.

2

제 1항에 있어서, 상기 VP3 유전체는 VP0 유전자, VP3 유전자 및 3C 유전자로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는, A형 간염바이러스 검출 또는 정량용 프라이머 및 프로브 세트.

3

삭제

4

제 1항에 있어서, 상기 프라이머 및 프로브 세트는 A형 간염바이러스의 전장 유전체 내에서 67bp, 76bp 및 107bp의 PCR 산물을 생성하는 것을 특징으로 하는, A형 간염바이러스 검출 또는 정량용 프라이머 및 프로브 세트.

5

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6

삭제

7

제 1항에 있어서, 상기 프로브는 5' 말단에 형광발색제(fluorescent reporter dye)가 표지되고 3' 말단에는 소광제(quencher)가 표지된 것인, A형 간염바이러스 검출 또는 정량용 프라이머 및 프로브 세트.

8

제 1항에 있어서, 상기 프라이머 및 프로브 세트는 TaqMan 기반 실시간 정량 중합효소연쇄반응(TaqMan-based real-time qPCR)용인, A형 간염바이러스 검출 또는 정량용 프라이머 및 프로브 세트.

9

삭제

10

삭제

11

삭제

12

제 1항의 프라이머 및 프로브 세트를 포함하는, A형 간염바이러스 감염 진단용 조성물.

13

제 12항의 조성물을 포함하는, A형 간염바이러스 감염 진단 키트.

14

(a) 검사 대상체로부터 분리한 생물학적 시료에서 RNA를 분리하는 단계;(b) 분리된 RNA로부터 cDNA를 합성하는 단계;(c) 제 1항의 프라이머 및 프로브 세트를 이용하여 TaqMan 기반 실시간 정량 중합효소연쇄반응을 수행하는 단계; 및 (d) 증폭 산물의 유무 및 증폭 산물의 양을 확인하는 단계를 포함하는 A형 간염바이러스의 검출 또는 정량 방법.

15

제 14항에 있어서, (d) 단계는: ⅰ) 농도별로 희석한 A형 간염바이러스의 표준 정량 시료를 이용하여 수행한 TaqMan 기반 실시간 정량 중합효소연쇄반응의 증폭 산물의 양을 측정하여 표준 곡선(standard curve)을 산출하는 단계; 및ⅱ) 시료로부터 수득한 RNA를 대상으로 수행한 TaqMan 기반 실시간 정량 중합효소연쇄반응 산물의 양을 산출된 표준 곡선에 도입하여 A형 간염바이러스를 정량하는 단계를 포함하는, A형 간염바이러스의 검출 또는 정량 방법.

16

제 14항에 있어서, 생물학적 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액, 소변 및 대변으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인, A형 간염바이러스의 검출 또는 정량 방법.