피부 조직의 투명화 방법, 이를 이용한 피부 조직의 3차원 영상화 방법 및 평가 및 진단 방법
METHOD FOR CLEARING MOLECULAR STRUCTURES IN SKINS, METHOD FOR THREE-DIMENSIONAL IMAGING AND METHOD FOR DIAGNOSIS AND EVALUATION USING THE SAME
특허 요약
본 발명은, 피부를 생검하는 단계; 상기 피부의 표피 조직을 분리하는 단계; 상기 표피 조직을 고정화하는 단계; 상기 고정화된 표피 조직에 히드로겔 단량체 용액을 주입하는 단계; 진공상태에서 상기 히드로겔 단량체를 중합하는 단계; 및 전기영동에 의해 상기 히드로겔 단량체가 중합된 표피 조직에서 지질을 제거하는 단계; 를 포함하는 피부 조직의 투명화 방법, 이를 이용한 3차원 영상화 방법 및 진단 및 평가방법에 관한 것이다. 본 발명은, 피부 조직의 투명화 시간을 단축시키고, 이러한 피부 조직의 투명화를 매개로 절편과정 없이 온전한 내구 분자구조에 대한 고해상도 3차원 영상 및 정보를 제공할 수 있다.
청구항
번호청구항
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피부를 생검하는 단계; 상기 피부의 표피 조직을 분리하는 단계; 상기 표피 조직을 고정화하는 단계;상기 고정화된 표피 조직에 히드로겔 단량체 용액을 주입하는 단계; 진공상태에서 상기 히드로겔 단량체를 중합하는 단계; 전기영동에 의해 상기 히드로겔 단량체가 중합된 표피 조직에서 지질을 제거하는 단계;상기 지질이 제거된 표피 조직에 선택적 표지자를 염색하는 단계;상기 염색된 표피 조직의 굴절계수를 보정하는 단계; 및 상기 굴절계수가 보정된 표피 조직의 3차원 영상을 촬영하는 단계; 를 포함하고,상기 고정화된 표피 조직에 히드로겔 단량체 용액을 주입하는 단계; 상기 진공상태에서 상기 히드로겔 단량체를 중합하는 단계; 및 전기영동에 의해 상기 히드로겔 단량체가 중합된 표피 조직에서 지질을 제거하는 단계는, 0.5일 내지 2일 동안 수행되는 것인,피부 조직의 3차원 영상화 방법.

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제7항에 있어서,상기 히드로겔 단량체를 중합하는 단계는, -100 kPa 내지 -50 kPa 압력의 진공 상태 및 20 ℃ 내지 50 ℃의 온도에서 1시간 내지 5시간 동안 상기 히드로겔 단량체를 중합하고,상기 전기영동에 의해 상기 히드로겔 단량체가 중합된 표피 조직에서 지질을 제거하는 단계는, 10 ℃ 내지 50 ℃의 온도 및 1.0 Å 내지 3 Å의 전류를 일정하게 유지하면서 전기영동에 의해 상기 지질을 제거하고, 1시간 내지 4시간 동안 상기 지질을 제거하고,상기 선택적 표지자를 염색하는 단계는,상기 지질이 제거된 피부의 표피 조직에 면역형광표지자를 처리하고, 원심력을 단계적으로 증가시켜 염색하는 것인, 피부 조직의 3차원 영상화 방법.

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제7항에 있어서,상기 선택적 표지자를 염색하는 단계는, 제1 면역형광표지자를 처리하고, 3000 rpm, 3500 rpm, 4000 rpm, 4500 rpm, 5000 rpm 및 5500 rpm의 원심력을 30분 단위로 단계적으로 증가시켜 염색하는 제1 염색 단계; 및제2 면역형광표지자를 처리하고, 3000 rpm, 3500 rpm, 4000 rpm, 및 4500 rpm의 원심력을 30분 단위로 단계적으로 증가시켜 염색하는 제2 염색 단계; 를 포함하는 것인, 피부 조직의 3차원 영상화 방법.

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제7항에 있어서,상기 염색된 표피 조직의 굴절계수를 보정하는 단계는, 용액(refractive index matching solution, RIMS) 내에서 20 ℃ 내지 25 ℃에서 0.5시간 내지 1.5시간 동안 상기 염색된 표피 조직의 굴절계수를 보정하는 것인, 피부 조직의 3차원 영상화 방법.

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제7항의 방법으로 표피 조직의 3차원 영상을 획득하는 단계; 및 상기 3차원 영상을 분석하는 단계; 를 포함하는, 표피 조직의 3차원 영상을 이용한 진단 및 평가방법.

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제11항에 있어서,상기 진단 및 평가방법은, 말초신경병, 피부 색소질환, 피부노화, 표피의 병적인 변화가 수반되는 피부질환들 중 1종 이상을 진단 및 평가하는 것인, 진단 및 평가방법.