보리 리보솜 억제 단백질을 이용한 재조합 단백질의 대량생산용 벡터 및 이를 이용한 재조합 단백질의 대량생산 방법
Vector for Mass Producing of Recombinant Protein Using Barley Ribosome-inactivating Protein and Method for Mass Producing of Protein Using the Same
특허 요약
본 발명은 보리에 존재하는 리보솜 억제 단백질 (bRIP1)을 이용하여, 재조합 단백질을 미생물에서 수용성(soluble)상태로 생산하는 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 목적단백질과 리보솜 억제 단백질 (bRIP1)이 융합단백질 형태로 발현되도록 하는 재조합 발현벡터 및 상기 벡터를 이용한 목적단백질을 수용성 상태로 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 종래 재조합 단백질의 수용화 생산을 위하여 사용되었던 단백질 보다, 높은 효율로 원핵세포에서 높은 효율로 재조합 단백질을 수용성 상태로 대량생산 할 수 있으며, 생산된 재조합 단백질의 정제 및 분리 또한 용이하다.
청구항
| 번호 | 청구항 |
|---|---|
| 1 | 목적단백질을 코딩하는 유전자와 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 가지는 보리유래 리보솜 억제 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하고, 숙주 미생물에서 목적단백질과 보리유래 리보솜 억제 단백질을 융합단백질 형태로 발현시킬 수 있는 재조합 벡터. |
| 2 | 삭제 |
| 3 | 제1항에 있어서, 목적단백질을 코딩하는 유전자와 보리유래 리보솜 억제 단백질을 코딩하는 유전자의 사이에 효소에 의한 절단서열이 삽입되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터. |
| 4 | 제3항에 있어서, 상기 절단서열을 절단하는 절단효소는 트롬빈, TEV(tobacco etch virus)프로테아제, 프리시션(PreScission) 프로테아제, Factor Xa 및 엔테로키나아제(Enterokinase)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터. |
| 5 | 제1항에 있어서, 보리유래 리보솜 억제단백질은 목적단백질의 N-말단에 발현되도록 연결되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터. |
| 6 | 제1항 및 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항의 재조합 벡터를 함유하는 재조합 미생물. |
| 7 | 다음 단계를 포함하는 목적단백질을 수용성 상태로 제조하는 방법:(a) 제6항의 재조합 미생물을 배양하여 목적단백질과 보리유래 리보솜 억제 단백질의 융합단백질을 수용성 상태로 생성시키는 단계 및(b) 생성된 융합단백질을 분리·정제하는 단계. |
| 8 | 제7항에 있어서, (c) 절단효소를 처리하여 목적단백질과 보리유래 리보솜 억제 단백질을 분리하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 목적단백질을 수용성 상태로 생산하는 방법. |
