펩티드 분리용 나노입자, 그 제조방법 및 이를 이용한 펩티드 분리방법
A NANOPARTICLE FOR SEPARATING PEPTIDE, METHOD FOR PREPARING THE SAME, AND METHOD FOR SEPARATING PEPTIDE USING THE SAME
특허 요약
본 발명은 펩티드 분리용 나노입자와 제조방법 및 이를 이용한 펩티드 분리방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 자성 나노입자의 표면에 티올(thiol) 선택성을 갖는 제1기능기가 결합되어, 시스테인을 포함하는 펩티드와 선택적으로 결합하는 펩티드 분리용 나노입자를 이용하여 특정 펩티드를 분리하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 특정 펩티드를 매우 선택적으로 간단하고 신속하게 분리할 수 있어, 암과 같은 질병 치료 연구에 유용하게 사용될 수 있다. 자성 나노입자, 펩티드, 시스테인
청구항
번호청구항
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제1항에 있어서, 상기 자성 나노입자는 산화철, 망간 또는 아연 중 어느 하나 이상이 도핑된 산화철, 코발트 및 니켈로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

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제1항에 있어서, 상기 나노입자의 직경은 25 내지 35nm인 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

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자성 나노입자의 표면에 티올(thiol) 선택성을 갖는 제1기능기가 결합되어, 시스테인을 포함하는 펩티드와 선택적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

2

제1항에 있어서, 상기 제1기능기는 2-피리딜디설파이드 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

3

제1항에 있어서, 상기 자성 나노입자는 실리카층으로 코팅되어 있으며, 상기 제1기능기는 상기 실리카층에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

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제1항에 있어서, 상기 나노입자의 표면에 입자의 응집을 방지하는 제2기능기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

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제4항에 있어서, 상기 제2기능기는 포스포네이트 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자.

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자성입자의 표면을 실리카층으로 코팅하여 자성 나노입자를 제조하는 단계; 및 시스테인을 포함하는 펩티드와 선택적으로 결합하는 티올 선택성을 갖는 제1기능기를 상기 실리카층에 결합시키는 단계를 포함하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제8항에 있어서, 상기 실리카층의 코팅 단계는 자성입자를 분산제와 함께 용매에 분산시키는 단계; 자성입자가 분산된 상기 분산액에 암모니아(NH3)와 테트라에틸오르쏘실리케이트(TEOS)를 첨가하여 상기 자성입자의 표면을 실리카층으로 코팅하는 단계; 상기 실리카 코팅된 자성입자를 침전시킨 후 용매로부터 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제8항에 있어서, 상기 제1기능기는 2-피리딜디설파이드 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제10항에 있어서, 상기 제1기능기의 결합단계는 나노입자를 용매에 분산시키는 단계; 상기 나노입자가 분산된 용매에 3-아미노프로필트리에톡시실란을 첨가하여 상기 나노입자의 실리카층에 3-아미노프로필 잔기를 포함하는 작용기를 결합시키는 단계; 3-아미노프로필 잔기를 포함하는 작용기가 결합된 상기 나노입자 분산액에 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트를 첨가하여 상기 나노입자에 2-피디딜디설파이드 잔기를 포함하는 작용기를 결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제8항에 있어서, 입자의 응집을 방지하는 제2기능기를 상기 실리카층에 결합시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제12항에 있어서, 상기 제2기능기는 포스포네이트 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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제13항에 있어서, 상기 제2기능기의 결합단계는 상기 나노입자를 용매에 분산시키는 단계; 및 나노입자가 분산된 상기 용매에 3-(트리히드록시실릴)프로필메틸포스포네이트를 첨가하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드 분리용 나노입자 제조방법.

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특정 펩티드와 선택적으로 결합하는 제1기능기를 갖는 자성 나노입자와 펩티드 혼합물을 혼합하는 단계; 상기 펩티드 혼합물 중 상기 제1기능기와 결합하는 특정 펩티드를 상기 나노입자와 결합시키는 단계; 및 상기 특정 펩티드와 결합된 나노입자를 상기 펩티드 혼합물로부터 분리하는 단계를 포함하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 나노 입자와 상기 특정 펩티드의 결합은 공유 결합인 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 특정 펩티드와 결합된 나노입자를 상기 펩티드 혼합물로부터 분리하는 단계는 자성 물질을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 특정 펩티드와 결합된 나노입자를 상기 펩티드 혼합물로부터 분리시키는 단계 이후에, 상기 나노입자로부터 특정 펩티드를 분리하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 제1기능기는 티올 선택성을 갖는 작용기이며, 상기 제1기능기와 결합하는 특정 펩티드는 시스테인을 포함하는 펩티드인 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제19항에 있어서, 상기 티올 선택성을 갖는 작용기는 2-피리딜설파이드 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 자성 나노입자는 입자의 응집을 방지하는 제2기능기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제21항에 있어서, 상기 제2기능기는 포스포네이트 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 자성 나노입자는 산화철, 망간 또는 아연 중 어느 하나 이상이 도핑된 산화철, 코발트 및 니켈로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 자성 나노입자의 표면이 실리카층으로 코팅되어 있는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제15항에 있어서, 상기 펩티드 혼합물은 단백질 또는 혈청(serum)인 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제25항에 있어서, 상기 나노입자와 결합하는 특정 펩티드는 전처리 과정에 의해 환원된 시스테인 또는 자연적으로 환원 상태로 존재하는 시스테인을 포함하는 펩티드 또는 단백질인 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.

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제26항에 있어서, 상기 나노입자와 결합된 자연적으로 환원 상태로 존재하는 시스테인을 포함하는 단백질을 분리하여 전체 시스테인 함유 단백질 중에서 환원 상태로 존재하는 시스테인을 포함하는 단백질의 비율을 측정하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 자성 나노입자를 이용한 펩티드 분리방법.