전사체 라이브러리 제조 방법 및 이를 이용한 전사체 분석 방법
A Method for preparing transcriptome library and method for analyzing transcriptome using the same
특허 요약
본 발명은 전사체 분석 방법에 대한 것으로, 하나의 반응 단위에서 수행가능하고 각 단계 간 정제 공정의 생략이 가능하여 NGS라이브러리 구축의 노동, 시간 및 비용을 획기적으로 줄여 대량의 전사체 프로파일링 및 약물 스크리닝 실험을 용이하게 할 수 있다.
청구항
번호청구항
3

제 1 항에 있어서, 단계 (1)의 상기 용해 버퍼는 옥틸페녹시 폴리(에틸렌옥시)에탄올 (Octylphenoxy poly(ethyleneoxy)ethanol)을 포함하는 것인, 전사체 라이브러리 제조하는 방법.

4

제1항에 있어서, 딘계 (4)의 시퀀싱은 NGS(Next Generation Sequencing) 방법인 전사체 라이브러리 제조하는 방법.

5

제1항에 있어서, 상기 단계 (1) 내지 (3)은 동시에 또는 순차적으로 수행되는 전사체 라이브러리 제조하는 방법.

6

제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 방법으로 전사체 라이브러리를 제조하는 단계;상기 제조된 전사체 라이브러리를 시퀀싱하는 단계;를 포함하는 전사체 분석 방법.

1

(1) 용해 버퍼로 세포를 용해하는 단계;(2) 단계 (1)의 용해물에 역전사 효소(reverstranscriptase)를 첨가하여 상기 용해물에 포함된 RNA를 역전사시켜 cDNA/RNA 하이브리드를 형성시키는 단계;(3) Tn5 트랜스포자아제(Tn5 transposase)를 첨가하여 단계 (2)의 cDNA/RNA 하이브리드를 태그화(Tagmentation) 하는 단계; 및(4) 단계 (3)의 태그된 cDNA를 증폭하는 단계를 포함하는 전사체 라이브러리 제조하는 방법.

2

제 1 항에 있어서, 각 단계간 중간 생성물의 정제 과정을 수행하지 않는, 전사체 라이브러리 제조하는 방법.

7

(1) 참조 약물의 처리 시 세포 내 유전자 발현 패턴을 제6항의 전사체 분석 방법을 수행하여 분석하는 단계;(2) 후보 약물 처리 시 세포 내 유전자 발현 패턴을 단계 (1)과 동일한 방법으로 분석하는 단계; 및(3) 단계 (1)의 전사체 분석 결과와 단계 (2)의 전사체 분석 결과를 비교하여 유전자 발현 패턴이 유사한 경우, 후보 약물이 참조 약물 동일한 의약 용도를 갖는 것으로 판단하는 단계를 포함하는 약물 스크리닝 방법.