PCR 과정 동안 생성되는 가닥들의 정보를 연결하여 하나의 클러스터를 만들고, 생성된 가닥들의 생성 순서를 추적할 수 있는 방법
METHOD FOR TRACKING THE GENERATION ORDER OF THE GENERAED STRANDS BY LINKING INFORMATION OF THE STRANDS GENERATED DURING THE PCR PROCESS TO CREATE A CLUSTER
특허 요약
본 발명은 PCR 과정 동안 생성되는 가닥들의 정보를 연결하여 하나의 클러스터를 만들고, 생성된 가닥들의 생성 순서를 추적할 수 있는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 본 발명은 UID 함유 프라이머를 사용하여 PCR 과정 후 모든 부모 가닥과 딸 가닥(daughter strand)이 하나의 UID를 공유하고, 이러한 공유 UID를 사용하여 두 가닥(부모 가닥과 딸 가닥)을 연결하며, 더 나아가서 손녀 가닥까지 확장해서 연결하여 첫 번째로 복사된 가닥에서 파생된 모든 자손 가닥에 연결될 수 있게 함으로써, 하나의 네트워크(클러스터)를 만드는 것 외에도 증폭 과정동안 생성된 가닥들의 생성 순서를 알 수 있으며, 증폭 계통(lineage of amplification) 을 구성하고, 오류 패턴을 관찰할 수 있다.
청구항
번호청구항
1

5‘ 말단에서 3’ 말단 방향으로 어댑터 서열, 플랭킹 서열 및 UID 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 이용하여 시료의 DNA 파편을 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 증폭하는 단계;상기 PCR을 통해 증폭된 DNA 파편들의 서열정보를 얻는 단계; 및상기 서열정보를 피어-투-피어(peer-to-peer, P2P) 네트워크 방식을 이용하여 클러스터를 생성하는 단계;상기 P2P 네트워크 방식은 상기 PCR을 통해 증폭된 DNA 파편들의 서열정보로부터 UID 쌍(pair)의 서열정보를 얻는 단계;상기 획득한 UID 쌍의 서열정보 중에서 제1 UID 서열정보를 포함하는 제2 UID를 그룹화하고, 제2 UID 서열정보를 포함하는 제1 UID를 그룹화하는 단계; 및상기 제2 UID를 그룹화한 것 또는 제1 UID를 그룹화한 것 중에서 하나의 UID 서열을 선택한 후 선택되지 않은 UID 그룹으로부터 선택된 UID 서열 쌍을 연결하는 단계를 포함하는 알고리즘 방식인를 포함하는 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

2

제1항에 있어서, 상기 어댑터 서열은 17bp 내지 69bp 길이인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

3

제1항에 있어서,상기 PCR을 통해 증폭된 DNA 파편들의 서열정보는 트리밍(trimming)하는 단계를 더 포함하는, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

4

제1항에 있어서, 상기 UID 서열은 12 내지 25개의 임의의 핵산으로 이루어진 것인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

5

제4항에 있어서,상기 UID 서열은 (N)m(X)n의 형태로 나열된 N과 X의 반복을 포함하고,상기 N은 랜덤염기이고 상기 X는 고정염기이며, 상기 m은 2 내지 5의 상수이고, n은 1 내지 2의 상수인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

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제1항에 있어서, 상기 PCR 은 3 내지 8 사이클 수로 수행되는 것인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

7

삭제

8

제1항에 있어서, 상기 클러스터는 상기 P2P 네트워크 방식을 통해 형성된 동일한 분자로부터 유래된 분자들을 포함하는 그룹인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

9

제1항에 있어서,상기 시료의 DNA는 ctDNA인, 타겟 핵산 검출을 위한 공통서열(consensus sequence) 생성방법.

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