| 번호 | 청구항 |
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| 1 | 인간 만능 줄기세포(human pluripotent stem cell, hPSC)를 유도 배지와 현탁하여 플레이트상에 제 1 접종하는 단계;상기 제 1 접종된 줄기세포를 유도 배지에서 중배엽 세포로 분화하도록 제 1 배양하는 단계;상기 제 1 배양된 세포를 분화 배지에서 내피세포로 분화하도록 제 2 배양하는 단계;상기 제 2 배양된 세포를 혈관 내피세포 계통의 세포로 선별하는 단계;선별된 상기 혈관 내피세포를 유지 배지와 현탁하여 플레이트상에 제 2 접종하는 단계, 및상기 제 2 접종된 혈관 내피세포를 유지 배지에서 증식하도록 계대 배양하는 단계를 포함하고,상기 유지 배지는,4 내지 6 ng/ml의 FGF2, 5 내지 10 ng/ml의 EGF, 10 내지 30 ng/ml의 VEGF-A 및 20 내지 50 ng/ml의 아스코르빅산을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 2 | 제 1 항에 있어서,상기 내피세포는,혈관 내피세포인, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 3 | 제 1 항에 있어서,상기 유도 배지는,4 내지 6 ng/ml의 FGF2 및 2 내지 4 μM의 CHIRR99021을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 4 | 제 1 항에 있어서,상기 분화 배지는,4 내지 6 ng/ml의 FGF2, 5 내지 10 ng/ml의 EGF, 10 내지 30 ng/ml의 VEGF-A 및 20 내지 30 ng/ml의 DLL4를 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 5 | 삭제 |
| 6 | 제 1 항에 있어서,상기 인간 만능 줄기세포는,배아 줄기 세포(embtyonic stem cell), 유도 만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell, iPSC) 및 체세포 핵치환 줄기세포 (somatic cell nuclear transfer cell, SCNT) 중 적어도 하나를 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 7 | 제 1 항에 있어서,상기 제 1 배양하는 단계는, 3일 동안 매일 배지를 교체하며 배양하는 단계인, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 8 | 제 1 항에 있어서,상기 제 2배양하는 단계는,11 내지 13일 동안 매일 배지를 교체하며 배양하는 단계인, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 9 | 제 1 항에 있어서,상기 플레이트는,콜라겐, 피브로넥틴, 라미닌, 라미닌 프래그먼트, 비트로넥린, 기저막 매트릭스, 젤라틴, 히알루론산, 폴리리신 및 비트로넥린 중 적어도 하나로 이루어진 코팅막을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 10 | 제 9항에 있어서,상기 코팅막은, 0.1 mg/ml의 상기 콜라겐을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 11 | 제 1 항에 있어서,상기 계대 배양은,1 내지 4 계대까지 수행되는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 12 | 제 1 항 내지 제 4 항 및 제 6 항 내지 제 11 항 중 어느 한 한의 방법으로 계대배양되고, 자성 세포 분류 및 유세포 분류와 같은 항원-항체 기반의 세포 분류가 사용되지 않고도, 상기 계대배양된 전체 세포에 대하여 CDH5를 발현하는 동질성(homogenous)의 내피세포를 98% 이상 포함하는, 심혈관계 질환의 예방용 또는 치료용 혈관 내피세포 주. |
| 13 | 4 내지 6 ng/ml의 FGF2, 5 내지 10 ng/ml의 EGF, 10 내지 30 ng/ml의 VEGF-A 및 20 내지 50 ng/ml의 아스코르빅산을 유효성분으로 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배지. |
| 14 | 혈관 내피세포 계통으로 분리된 세포를 4 내지 6 ng/ml의 FGF2, 5 내지 10 ng/ml의 EGF, 10 내지 30 ng/ml의 VEGF-A 및 20 내지 50 ng/ml의 아스코르빅산을 유효성분으로 포함하는 유지 배지와 현탁하여 플레이트상에 접종하는 단계, 및접종된 상기 혈관 내피세포를 상기 유지 배지에서 혈관 내피세포의 특성이 유지되도록 계대 배양하는 단계를 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 15 | 제 14 항에 있어서,상기 플레이트는,콜라겐, 피브로넥틴, 라미닌, 라미닌 프래그먼트, 비트로넥린, 기저막 매트릭스, 젤라틴, 히알루론산, 폴리리신 및 비트로넥린 중 적어도 하나로 이루어진 코팅막을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 16 | 제 15항에 있어서,상기 코팅막은,0.1 mg/ml의 상기 콜라겐을 포함하는, 혈관 내피세포 특성 유지 배양 방법. |
| 17 | 제 14 항에 있어서,상기 계대 배양은,1 내지 4 계대까지 수행되는, 혈관 내피세포 특성 유지 계대 배양 방법. |
| 18 | 제 14 항에 있어서,상기 계대 배양된 세포는,CDH5 양성 세포 발현이 4계대까지 98 % 이상 유지되는, 혈관 내피세포 특성 유지 계대 배양 방법. |
| 19 | 제 14 항에 있어서,상기 계대 배양된 세포는,PECAM1 양성 세포 발현이 4계대까지 40 % 이상 유지되는, 혈관 내피세포 특성 유지 계대 배양 방법. |
| 20 | 제 14 항에 있어서,상기 계대 배양된 세포는,VWF 양성 세포 발현이 4계대까지 88 % 이상 유지되는, 혈관 내피세포 특성 유지 계대 배양 방법. |
