하나의 올리고뉴클레오티드를 이용해서 올리고뉴클레오티드 풀을 생산하는 방법
METHOD FOR GENERATING POOL CONTAINING OLIGONUCLEOTIDES FROM A OLIGONUCLEOTIDE
특허 요약
본 발명은 본 발명은 하나의 올리고뉴클레오티드 및 차세대 시퀀싱(next generation sequencing, NGS)을 이용하여 다양한 염기서열 조합을 갖는 올리고뉴클레오티드의 풀(pool)을 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 종래 비용 및 시간이 많이 소요되었던 마이크로어레이칩의 사용이 필요없고, 다양한 조합의 올리고뉴클레오티드를 얻기 위한 많은 횟수의 합성단계를 줄일 수 있어 비용 및 시간 효율적으로 올리고뉴클레오티드 풀을 생산할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법에 의하는 경우, 올리고뉴클레오티드 풀을 생산하는 단계를 간소화 하였는바, 생산 및 활용 가능한 올리고뉴클레오티드 조합의 수를 기하급수적으로 늘릴 수 있고, 유전물질의 다양한 용도 확장을 가능하게 할 수 있다.
청구항
번호청구항
1

길이가 100mer 이상이며, 길이가 R mer인 랜덤 부위를 포함하는 하나의 시작 올리고뉴클레오티드로부터 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드를 합성하는 단계; 및 클론 올리고뉴클레오티드들 중에서 원하는 염기서열로 이루어진 랜덤 부위를 포함하는 클론 올리고뉴클레오티드를 선택하기 위해 상기에서 합성된 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드에 대하여 차세대 시퀀싱을 수행하여 클론 올리고뉴클레오티드 각각의 전체 염기서열을 확인하는 단계;를 포함하고, 여기에서, 상기 합성은 클론 올리고뉴클레오티드가 랜덤 부위를 포함하도록 수행되며,상기 랜덤 부위는 길이가 R mer 이고, A, T, C, G로 만들어질 수 있는 염기서열 4R 개로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 염기서열로 이루어진 것인, 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

2

제1항에 있어서, 상기 전체 염기서열이 확인된 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드 중에서 원하는 염기서열로 이루어진 랜덤 부위를 포함하는 클론 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계;를 더 포함하는 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

3

제1항에 있어서, 상기 생산 방법은 합성하는 단계를 한 번만 수행하는 것이고, 상기 올리고뉴클레오티드 풀(pool)은 랜덤 부위의 염기서열이 서로 다른 클론 올리고뉴클레오티드를 2개 내지 4R 개 포함하는 것인, 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

4

제1항에 있어서, 상기 하나의 올리고뉴클레오티드는 양측 말단에 차세대 시퀀싱(next generation sequencing, NGS)을 위한 아답터 서열이 존재하는 아답터 부위(adaptor space)를 포함하는 것인, 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

5

삭제

6

제1항에 있어서, 상기 R은 2 내지 20의 정수 인, 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

7

제1항에 있어서,상기 하나의 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 염기서열 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루진 것인, 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산하는 방법.

8

길이가 100mer 이상이며, 길이가 R mer인 랜덤 부위를 포함하는 하나의 시작 올리고뉴클레오티드로부터 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드를 합성하는 단계;클론 올리고뉴클레오티드들 중에서 원하는 염기서열로 이루어진 랜덤 부위를 포함하는 클론 올리고뉴클레오티드를 선택하기 위해 상기에서 합성된 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드에 대하여 차세대 시퀀싱을 수행하여 클론 올리고뉴클레오티드 각각의 전체 염기서열을 확인하는 단계; 상기 전체 염기서열이 확인된 각각의 클론 올리고뉴클레오티드 랜덤 부위의 염기서열을 x-y좌표 상에 입력하여 맵핑하는 단계; 및시퀀싱 플레이트로부터 저장하고자 하는 정보를 인코딩한 염기서열과 매칭되는 염기서열을 포함하는 클론 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계;를 포함하고, 여기에서, 상기 합성은 클론 올리고뉴클레오티드가 랜덤 부위를 포함하도록 수행되며, 상기 랜덤 부위는 길이가 R mer 이고, A, T, C, G로 만들어질 수 있는 염기서열 4R 개로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 염기서열로 이루어진 것이며, 상기 랜덤 부위의 염기서열은 위치(address) 정보를 암호화하는 위치서열 및 데이터 정보를 암호화하는 데이터서열로 이루어진, DNA에 정보를 저장하는 방법.

9

제8항에 있어서,DNA에 저장하고자 하는 정보(대상 정보)를 A, T, C, G로 만들어 질 수 있는 염기서열로 인코딩하는 단계;를 더 포함하는 것인, DNA에 정보를 저장하는 방법.

10

서열번호 1의 염기서열 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 하나의 올리고뉴클레오티드로 복수 개의 클론 올리고뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 풀(pool)을 생산할 수 있는 올리고뉴클레오티드.