임상―등급 적혈구의 인 비트로 대량 생산 방법
Process of In Vitro Mass Production of Clinical―Grade Red Blood Cells
특허 요약
본 발명은 폴록사머(poloxamer)를 포함하는 배지에서 적혈구 전구세포(erythroid progenitor cell)를 배양하는 단계를 포함하는 적혈구(red blood cell)의 인 비트로 생산 방법; 폴록사머를 포함하는 적혈구의 인 비트로 생산용 배지; 및 제대혈 혈장을 포함하는 적혈구의 인 비트로 생산용 배지에 관한 것이다. 본 발명은 폴록사머를 이용하여 적혈구 전구세포의 생존율을 크게 향상시켜 결국 적혈구 생산성을 향상시켜 적혈구 전구세포로부터 적혈구의 인 비트로 생산성을 크게 향상시킨다. 본 발명에 따르면 임상-등급의 적혈구를 인 비트로 배양 방법으로 얻을 수 있으며, 적혈구의 배양에 통상적으로 이용되는 동물혈청 또는 인간 혈청의 대체제로서 제대혈 혈장을 제공한다. RBCs, 적혈구 형성 과정, F68, 인 비트로 대량 생산, 제대혈 혈장, 액상배양
청구항
번호청구항
1

다음의 단계를 포함하는 적혈구(red blood cell)의 인 비트로 생산 방법:(a) 제대혈(cord blood, CB)로부터 CD34+ 세포를 분리하는 단계; 및(b) 상기 CB CD34+ 세포를 4단계로 배양하여 적혈구로 분화시키는 단계로, 상기 4단계는 (i) I기(0-7일), 상기 CB CD34+ 세포를 하이드로코티손(1 mM/l), SCF(100 ng/ml), 인터루킨(IL)-3(10 ng/ml) 및 에리스로포이에틴(EPO; 6 IU/ml)이 보충된 배지에서 배양하는 단계; (ii) II기(7-13일), 상기 I기에서 배양된 세포 중 적혈구계 세포(erythroid cells)를 SCF(50 ng/ml), IL-3(10 ng/ml) 및 EPO(3 IU/ml)이 보충된 배지에서 배양하는 단계; (iii) III기(13-17일), 상기 적혈구계 세포(erythroid cells)를 SCF(50 ng/ml) 및 EPO(3 IU/ml)이 보충된 배지에서 배양하는 단계; 및 (iv) IV기(17-21일 또는 17-24일), 상기 세포를 사이토카인-결핍 배지에서 배양하여 탈핵시키는 단계로 이루어져 있으며, 각 단계에서 이용되는 배지는 폴리에틸렌옥사이드의 함량이 50-90%인 폴록사머를 포함하는 것을 특징으로 하는 인 비트로 생산 방법.

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제 1 항에 있어서, 상기 배양은 기질세포의 존재 또는 부존재 하에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.

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제 5 항에 있어서, 상기 배양은 기질세포의 부존재 하에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.

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제 1 항에 있어서, 상기 배지는 제대혈 혈장을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

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9

제 1 항에 있어서, 상기 폴록사머는 폴리프로필렌 옥사이드의 분자량이 1,000-3,000 g/mol인 것을 특징으로 하는 방법.

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