여러 가지 폴리(에스터 아마이드)의 제조방법
Method for Preparing Various Poly(ester Amide)
특허 요약
대사공학적으로 엔지니어링된 재조합 미생물효소 및 이를 이용한폴리(에스터 아마이드)의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 재조합 미생물 및 이를 이용한 폴리(에스터 아마이드)의 제조방법은 포도당, 아미노산, 하이드록시산, 카르복실산 등과 같은 다양한 탄소원으로부터 다양한 폴리에스터 아마이드폴리(에스터 아마이드) 고분자를 생합성할 수 있으므로들을 제조할 수 있어, 폴리에스터 아마이드폴리(에스터 아마이드)의 산업적 생산에 유용하다.
청구항
번호청구항
1

숙주 미생물에 코엔자임 A 전이효소(Coenzyme A transferase)를 코딩하는 유전자 및 PHA 합성효소(polyhydroxyalkanoate synthase)를 코딩하는 유전자가 도입 또는 증폭되어 있는, 폴리(에스터 아마이드)의 생성능을 갖는 재조합 미생물.

2

제1항에 있어서, 탄소원으로부터 상기 코엔자임 A 전이효소의 기질이 되는 유기산의 생합성 경로를 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

3

제2항에 있어서, 상기 탄소원은 당 또는 유기산인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

4

제2항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소의 기질이 되는 유기산은 아미노산 및 하이드록시산 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

5

제1항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소는 아미노산을 기질로 하는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

6

제5항에 있어서, 상기 아미노산은 글리신, 알라닌, 2-아미노뷰티레이트(2-aminobutyrate), 3-아미노프로피오네이트(3-aminopropionate), 아이소세린(Isoserine), 3-아미노뷰티레이트(3-aminobutyrate), 3-아미노발러레이트(3-aminovalerate), 베타-페닐알라닌 (beta-phenylalanine; BPA), 4-아미노뷰티레이트(4-aminobutyrate), 4-아미노-3-메틸뷰티레이트(4-amino-3-methylbutyrate), 5-아미노발러레이트(5-aminovalerate), 6-아미노카프로에이트(6-aminocaproate), 7-아미노헵타노에이트(7-aminoheptanoate), 3-아미노아이소뷰티레이트(3-aminoisobutyrate), 파라-아미노벤조에이트(para-aminobenzoate; PAB) 및 이의 이성질체로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

7

제1항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소는 베타-알라닌 코엔자임 A 전이효소인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

8

제1항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소를 코딩하는 유전자는 클로스트리듐 프로피오니쿰(Clostridium propionicum) 유래의 act 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

9

제1항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소는 서열번호1 내지 3에서 선택되는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

10

제1항에 있어서, 상기 PHA 합성효소는 PhaC인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

11

제1항에 있어서, 상기 PHA 합성효소를 코딩하는 유전자는 큐프리아비더스 네케터 (Cupriavidus necator), 에어로모나스 케비에 (Aeromonas caviae), 에어로모나스 하이드로필리아 (Aeromonas hydrophila), 에어로모나스 살모니시다 (Aeromonas salmonicida), 슈도모나스 MBEL 6-19 (Pseudomonas sp. MBEL 6-19), 슈도모나스 61-3 (Pseudomonas sp. 61-3), 슈도모나스 푸티다 KT2440 (Pseudomonas putida KT2440), 슈도모나스 아르지노사 PAO1 (Pseudomonas aeruginosa PAO1), 슈도모나스 클로로라피스 (Pseudomonas chlororaphis), 및 슈도모나스 레시노보렌스 (Pseudomonas resinovorans)로 구성된 군에서 선택되는 균주로부터 유래한 phaC 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

12

제1항에 있어서, 상기 PHA 합성효소는 서열번호 4 내지 13으로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

13

제1항에 있어서, 상기 폴리(에스터 아마이드)는 상기 코엔자임 A 전이효소의 기질이 되는 유기산을 단량체로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

14

제13항에 있어서, 상기 코엔자임 A 전이효소의 기질이 되는 유기산은 글리신, 알라닌, 2-아미노뷰티레이트(2-aminobutyrate), 3-아미노프로피오네이트(3-aminopropionate), 아이소세린(Isoserine), 3-아미노뷰티레이트(3-aminobutyrate), 3-아미노아이소뷰티레이트(3-aminoisobutyrate), 3-아미노발러레이트(3-aminovalerate), 베타-페닐알라닌 (beta-phenylalanine; BPA), 4-아미노뷰티레이트(4-aminobutyrate), 4-아미노-3-메틸뷰티레이트(4-amino-3-methylbutyrate), 파라-아미노벤조에이트(para-aminobenzoate; PAB), 5-아미노발러레이트(5-aminovalerate), 6-아미노카프로에이트(6-aminocaproate), 7-아미노헵타노에이트(7-aminoheptanoate), 글리콜레이트, 락테이트, 2-하이드록시뷰티레이트(2-hydroxybutyrate), 3-하이드록시프로피오네이트(3-hydroxypropionate), 3-하이드록시뷰티레이트(3-hydroxybutyrate), 프로피오네이트(propionate), 뷰티레이트(butyrate), 이소뷰티레이트(isobutyrate), 발러레이트(valerate), 이소발러레이트(isovalerate), 2-메틸뷰티레이트(2-methylbutyrate), 카프로에이트(caproate), 말로네이트(malonate), 숙시네이트(succinate) 및 이의 이성질체로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

15

제1항에 있어서, 상기 숙주 미생물은 상기 재조합 미생물은 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.

16

다음의 단계를 포함하는 폴리(에스터 아마이드)의 제조방법:(a) 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 재조합 미생물을 배양하여 폴리(에스터 아마이드)를 생산하는 단계; 및(b) 상기 생산된 폴리(에스터 아마이드)를 회수하는 단계.

17

다음의 단계를 포함하는 폴리(에스터 아마이드)의 제조방법:(a) 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 재조합 미생물을 코엔자임 A 전이효소의 기질이 되는 유기산이 첨가된 배지에서 배양하여 폴리(에스터 아마이드)를 생산하는 단계; 및(b) 상기 생산된 폴리(에스터 아마이드)를 회수하는 단계.

18

제16항의 방법으로 제조된 폴리(에스터 아마이드).