조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법 및 이의 응용
Method of providing location information of tissue-specific secretory proteins and uses thereof
특허 요약
본 발명은 근접 표지(proximity labeling) 시스템을 이용하여 특정 조직에서 분비되는 단백질의 위치 정보를 제공하는 방법 내지 이의 응용에 관한 것이다. 본 발명에 따른 방법을 이용하는 경우, 살아있는 개체 내 특정 조직에서 분비되는 분비단백질의 시공간 역학을 동적으로 추적할 수 있어 조직간 내분비 신호 연구에 효과적으로 활용할 수 있으며, 특히 현장(in situ)에서 적용할 수 있어 활용범위가 더욱 넓어질 수 있다. 따라서, 본 발명은 다양한 질환 모델 내지 조직들에 적용하여 질병과 관련된 새로운 바이오마커 및 치료 표적 단백질을 발굴하는데에 활용될 수 있다.
청구항
번호청구항
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a) 바이오틴 결합효소가 부착된 막 단백질을 발현하는 재조합 바이러스를 제조하는 단계; b) 상기 단계 a)의 바이러스를 개체 내 조직에 전달하는 단계; c) 상기 단계 b)의 바이러스를 전달받은 개체의 조직에서 바이오틴 결합효소가 부착된 막 단백질을 발현시키는 단계; d) 상기 단계 c)의 단백질이 발현된 개체에 바이오틴을 주입하여 상기 조직의 특이적 분비단백질을 바이오틴으로 선택적 표지하는 단계; e) 상기 단계 d)의 바이오틴을 주입한 개체의 시료를 수득하는 단계; f) 상기 단계 e)의 시료를 원심분리 후 상층액만 회수하는 단계;g) 상기 단계 f)의 상층액에 스트렙타비딘 비드를 첨가하여 펩티드를 수득하는 단계; 및h) 상기 단계 g)의 수득된 펩티드를 분석하여 상기 분비단백질의 위치를 확인하는 단계;를 포함하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법으로,상기 막 단백질은 분비 경로에 있는 조직 내 세포 소기관 막 단백질로, 내강 방향 말단에 바이오틴 결합효소가 부착되어 조직에서 발현되고,상기 개체는 인간을 제외한 동물인, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법으로, 상기 단계 a)의 바이오틴 결합효소는 상기 조직 특이적 분비단백질을 바이오틴 표지화하는 BioID 및 TurboID로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 단계 a)의 막 단백질은 SEC61B(Protein transport protein Sec61 subunit beta)인 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 단계 a)의 바이러스는 아데노 바이러스, 레트로 바이러스, 헤르페스 바이러스, 렌티 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 레오바이러스로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 단계 b)의 조직은 간 인 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 단계 e)의 시료는 혈액, 소변 및 체액 으로 이루어진 군에서 선택되는 어느하나 이상인 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 단계 h) 의 분석은 질량 분석, 웨스턴 블롯, 형광 현미경 분석, 닷 블록 및 ELISA로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 방법을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제7항에 있어서, 상기 질량 분석은 상기 펩티드를 질량 분석기를 이용하여 분석하는 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 스트렙타비딘 비드는 스트렙타비딘이 코팅된 자성 비드인 것인, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제1항에 있어서, 상기 개체는 질환 모델에서 유래한 개체인 것을 특징으로 하는, 조직 특이적 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.