세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법
METHOD OF PROVIDING LOCATION INFORMATION OF SECRETARY PROTEIN IN CELLS
특허 요약
본 발명은, 근접 표지(proximity labeling) 시스템 세포 내 분비단백질 경로에 적용함으로써 목적하는 세포 소기관 또는 세포로부터 분비되는 분비단백질을 표지하고, 동정 및 추적함으로써 상기 분비단백질의 종류 및 위치를 확인할 수 있는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 목적 단백질에 바이오틴 결합효소를 부착하여 세포에서 발현시키는 단계; 상기 세포에 바이오틴을 처리하여 상기 목적 단백질이 위치하는 세포 소기관의 분비단백질을 바이오틴으로 선택적 표지하는 단계; 상기 세포를 용해하여 세포 용해물을 수득하는 단계; 상기 세포 용해물을 원심분리 후 상층액만 회수하는 단계; 상기 상층액에 스트렙타비딘 비드를 첨가하여 펩티드를 수득하는 단계; 및 상기 수득된 펩티드를 분석하여 상기 세포 내 분비단백질의 위치를 확인하는 단계;를 포함하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 소포체 막 단백질의 소포체 내강 방향인 C-말단에 바이오틴 결합효소를 부착함으로써 소포체 내강에서 합성되는 분비단백질을 선택적으로 바이오틴 표지할 수 있으며, 그에 따라 분비단백질의 종류 및 위치 정보를 배양세포 수준뿐만 아니라 실제 동물 모델에서도 보다 정확도 높게 동정할 수 있으므로, 기초 생명과학연구, 의약 개발, 및 의료 진...(이하생략)
청구항
번호청구항
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제 6항에 있어서, 상기 질량 분석은 상기 펩티드를 질량 분석기를 이용하여 분석하는 것을 특징으로 하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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분비 경로에 있는 세포 소기관 막 단백질의 내강 방향 말단에 바이오틴 결합효소를 부착하여 세포에서 발현시키는 단계;상기 세포에 바이오틴을 처리하여 상기 막 단백질이 위치하는 세포 소기관의 분비단백질을 바이오틴으로 선택적 표지하는 단계;상기 세포를 용해하여 세포 용해물을 수득하는 단계;상기 세포 용해물을 원심분리 후 상층액만 회수하는 단계;상기 상층액에 스트렙타비딘 비드를 첨가하여 펩티드를 수득하는 단계; 및상기 수득된 펩티드를 분석하여 상기 세포 내 분비단백질의 위치를 확인하는 단계;를 포함하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법으로, 상기 바이오틴 결합효소는 상기 세포 내 분비단백질을 바이오틴 표지화하는 BioID, TurboID 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것인, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 막 단백질은 SEC61B(Protein transport protein Sec61 subunit beta)인 것을 특징으로 하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 바이오틴 결합효소는 상기 막 단백질의 C-말단에 부착되는 것인, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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삭제

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제 1항에 있어서, 상기 세포는 암 세포, 신장 세포, 피부 세포, 난소 세포, 활막세포, 말초혈액단핵구 세포, 섬유아세포, 섬유세포, 신경세포, 상피세포, 각질세포, 조혈세포, 멜라닌 세포, 연골세포, 대식세포, 근육세포, 혈액 세포, 골수 세포, 림프구 세포, 단핵세포, 폐 세포, 췌장 세포, 간 세포, 위 세포, 장 세포, 심장 세포, 방광 세포, 요도 세포, 배아 생식세포, 난구세포, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 수득된 펩티드를 분석하는 단계는 질량 분석, 웨스턴 블롯, 형광 현미경 분석, 닷 블록, ELISA, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 방법을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 세포 소기관은 미토콘드리아, 소포체, 핵, 세포질, 골지체, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 스트렙타비딘 비드는 스트렙타비딘이 코팅된 자성 비드인 것인, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법.