개선된 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물 및 이를 이용한 프로판올의 제조방법
Recombinant Microorganisms Having Enhanced Propanol and Method for Preparing Propanol Using the Same
특허 요약
본 발명은 고농도 및 고수율의 프로판올 (propanol) 생성능을 가지는 변이 미생물 및 이를 이용한 프로판올의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 쓰레오닌 (threonine)으로부터 프로판올의 생합성에 관여하는 효소들을 코딩하는 유전자가 도입되어 있는 고농도 및 고수율의 프로판올 (propanol) 생성능을 가지는 변이 미생물 및 이를 이용한 프로판올의 제조방법에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
1

쓰레오닌 (threonine) 생성능을 가지는 미생물에,(a) 쓰레오닌 디하이드라타제 (threonine dehydratase)를 코딩하는 유전자를 도입 또는 증폭;(b) 2-케토부티르산염 (2-ketobutyrate)을 프로피오네이트 (propionate)로 전환하는 효소인 아세테이트 키나아제 A (acetate kinase A) 또는 프로피오네이트 키나아제 Ⅲ (propionate kinase Ⅲ)를 코딩하는 유전자, 프로피오네이트 (propionate)를 프로피오닐-CoA (propionyl-CoA)로 전환하는 효소인 아세틸-CoA:아세토아세틸-CoA 신세이즈 (acetyl-CoA:acetoacetyl-CoA synthase)를 코딩하는 유전자, 프로피오닐-CoA (propionyl-CoA)를 프로판올 (propanol)로 전환하는 효소인 알콜 디하이드로게나아제 (alcohol dehydrogenase)인 서열번호 71 로 표시되는 adhEmut를 코딩하는 유전자를 도입 또는 증폭; (c) 아세틸-CoA (acetyl-CoA)와 피루베이트 (pyruvate)를 2-케토부티르산염 (2-ketobutyrate)로 전환하는 효소인 (R)-시트라말레이트 신쎄이즈 ((R)-citramalate synthase)를 코딩하는 유전자를 도입 및 증폭; 및(d) 아세토락테이트 신세이즈 Ⅲ (acetolactate synthase Ⅲ) 및 아세토락테이트 신세이즈 Ⅰ (acetolactate synthase Ⅰ)를 코딩하는 유전자를 결실 또는 약화시키는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 (propanol) 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

2

제 1 항에 있어서, 상기 미생물은 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

3

제 2 항에 있어서, 상기 박테리아는 코리네박테리움(Corynebacterium) 속, 브레비박테리움(Brevibacterium) 속 및 대장균으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

4

제 1 항에 있어서, 상기 쓰레오닌 디하이드라타제 (threonine dehydratase)를 코딩하는 유전자는 ilvA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

5

제 1 항에 있어서, 상기 아세토락테이트 신세이즈 Ⅲ (acetolactate synthase Ⅲ)를 코딩하는 유전자는 ilvI 및 ilvH인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

6

제 1 항에 있어서, 상기 아세토락테이트 신세이즈 Ⅰ (acetolactate synthase Ⅰ)를 코딩하는 유전자는 ilvB 및 ilvN인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

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삭제

8

제 1 항에 있어서, 상기 아세테이트 키나아제 A (acetate kinase A) 또는 프로피오네이트 키나아제 Ⅲ (propionate kinase Ⅲ)를 코딩하는 유전자는 ackA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

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10

제 1 항에 있어서, 상기 아세틸-CoA:아세토아세틸-CoA 신세이즈 (acetyl-CoA:acetoacetyl-CoA synthase)를 코딩하는 유전자는 atoD 및 atoA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

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14

제 1 항에 있어서, 상기 (R)-시트라말레이트 신쎄이즈 ((R)-citramalate synthase)를 코딩하는 유전자는 leuA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법.

15

쓰레오닌 (threonine) 생성능을 가지는 미생물에,(a) 쓰레오닌 디하이드라타제 (threonine dehydratase)를 코딩하는 유전자가 도입 또는 증폭;(b) 2-케토부티르산염 (2-ketobutyrate)을 프로피오네이트 (propionate)로 전환하는 효소 효소인 아세테이트 키나아제 A (acetate kinase A) 또는 프로피오네이트 키나아제 Ⅲ (propionate kinase Ⅲ)를 코딩하는 유전자, 프로피오네이트 (propionate)를 프로피오닐-CoA (propionyl-CoA)로 전환하는 효소인 아세틸-CoA:아세토아세틸-CoA 신세이즈 (acetyl-CoA:acetoacetyl-CoA synthase)를 코딩하는 유전자, 프로피오닐-CoA (propionyl-CoA)를 프로판올 (propanol)로 전환하는 효소인 알콜 디하이드로게나아제 (alcohol dehydrogenase)인 서열번호 71 로 표시되는 adhEmut를 코딩하는 유전자가 도입 또는 증폭; (c) 아세틸-CoA (acetyl-CoA)와 피루베이트 (pyruvate)를 2-케토부티르산염 (2-ketobutyrate)로 전환하는 효소인 (R)-시트라말레이트 신쎄이즈 ((R)-citramalate synthase)를 코딩하는 유전자가 도입 및 증폭; 및(d) 아세토락테이트 신세이즈 Ⅲ (acetolactate synthase Ⅲ) 및 아세토락테이트 신세이즈 Ⅰ (acetolactate synthase Ⅰ)를 코딩하는 유전자가 결실 또는 약화되어 있는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 (propanol) 생성능을 가지는 변이 미생물.

16

제 15 항에 있어서, 상기 미생물은 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

17

제 16 항에 있어서, 상기 박테리아는 코리네박테리움(Corynebacterium) 속, 브레비박테리움(Brevibacterium) 속 및 대장균으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

18

제 15 항에 있어서, 상기 쓰레오닌 디하이드라타제 (threonine dehydratase)를 코딩하는 유전자는 ilvA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

19

제 15 항에 있어서, 상기 아세토락테이트 신세이즈 Ⅲ (acetolactate synthase Ⅲ)를 코딩하는 유전자는 ilvI 및 ilvH인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

20

제 15 항에 있어서, 상기 아세토락테이트 신세이즈 Ⅰ (acetolactate synthase Ⅰ)를 코딩하는 유전자는 ilvB 및 ilvN인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

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삭제

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제 15 항에 있어서, 상기 아세테이트 키나아제 A (acetate kinase A) 또는 프로피오네이트 키나아제 Ⅲ (propionate kinase Ⅲ)를 코딩하는 유전자는 ackA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

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제 15 항에 있어서, 상기 아세틸-CoA:아세토아세틸-CoA 신세이즈 (acetyl-CoA:acetoacetyl-CoA synthase)를 코딩하는 유전자는 atoD 및 atoA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

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28

제 15 항에 있어서, 상기 (R)-시트라말레이트 신쎄이즈 ((R)-citramalate synthase)를 코딩하는 유전자는 leuA인 것을 특징으로 하는 고농도 및 고수율의 프로판올 생성능을 가지는 변이 미생물.

29

제 15 항 내지 제 20 항, 제 22 항, 제 24 항 및 제 28 항 중 어느 한 항의 변이 미생물을 배양하여 프로판올을 제조하는 방법.