| 번호 | 청구항 |
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| 1 | 다음 단계를 포함하는, 오일(oil) 생성능을 가지는 미생물을 이용한 지방산 알킬에스테르의 제조방법:(a) 오일(oil) 생성능을 가지고, 트리아실 글리세롤 리파아제(triacyl glycerol lipase), 모노아실 글리세라이드 리파아제(monoacyl glyceraid lipase) 및 리소포스포리파아제(lysophospholipase)로 구성된 군에서 선택된 2 이상의 리파아제를 코딩하는 유전자가 도입된 미생물을 배양하여, 오일을 생성시키는 단계;(b) 상기 생성된 오일을 함유하는 미생물에서 오일의 자가분해를 유도하여 유리 지방산을 생성시키는 단계; 및(c) 상기 생성된 유리 지방산에 알코올을 첨가하고, 반응시켜 지방산 알킬에스테르를 제조하는 단계. |
| 2 | 제1항에 있어서, 상기 오일은 트리아실글리세롤(triacylglycerol, TAG), 다이아실글리세롤(diacylglycerol, DAG), 모노아실글리세롤(monoacylglycerol, MAG), 포스포리피드(phospholipid), 스테롤 리피드(sterol lipid), 스핑고리피드(sphingolipid), 사카로리피드(saccharolipid), 프레놀리피드(prenol lipid) 및 폴리케타이드(polyketide)로 구성된 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 3 | 제1항에 있어서, 상기 오일 생성능을 가지는 미생물은 Aeromonas 속 미생물, Achromobacter 속 미생물, Acidovorax delafieldii, Acidovax facilis, Acinetobacter 속 미생물, Actinomyces 속 미생물, Aeromonas 속 미생물, Alcaligenes 속 미생물, Alteromonas 속 미생물, Althornia 속 미생물, Aplanochytrium 속 미생물, Aspergillus 속 미생물, Amoebobacter 속 미생물, Aphanocapa sp., Aphanothece sp. Aquaspirillum autotrophicum, Azorhizobium caulinodans, Azospirillum sp., Azospirillum 속 미생물, Azotobacter 속 미생물, Bacillus 속 미생물, Beggiatoa 속 미생물, Beijerinckia 속 미생물, Beneckea 속 미생물, Blakeslea 속 미생물, Bordetella pertussis, Bradyrhizobium japonicum, Caryophamon latum, Caulobacter 속 미생물, Chlorogloea 속 미생물, Chromatium 속 미생물, Chromobacterium 속 미생물, Clostridium 속 미생물, Comamonas 속 미생물, Corynebacterium 속 미생물, Crypthecodinium 속 미생물, Cyanobacteria 속 미생물, Derxia 속 미생물, Desulfonema 속 미생물, Desulfosacina variabilis, Desulfovibrio sapovorans, Ectothiorhodospira 속 미생물, Elina 속 미생물, Entomophthora 속 미생물, Ferrobacillus ferroxidans, Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae, Halobacterium 속 미생물, Haloferax mediterranei, Hydroclathratus clathratus, Hydrogenomonas facilis, Hydrogenophaga 속 미생물, Hyphomicrobium 속 미생물, Ilyobacter delafieldii, Japonochytrium 속 미생물, Labrys monachus, Lamprocystis reseopersicina, Lampropedia hyalina, Legionella sp., Leptothrix discophorus, Methylobacterium 속 미생물, Methylosinus 속 미생물, Micrococcus 속 미생물, Mortierella 속 미생물, Mycobacterium 속 미생물, Nitrobacter 속 미생물, Nocardia 속 미생물, Paracoccus dentrificans, Oscillatoria limosa, Penicillium cyclopium, Photobacterium 속 미생물, Physarum ploycephalum, Phycomyces 속 미생물, Pseudomonas 속 미생물, Pythium 속 미생물, Ralstonia 속 미생물, Rhizobium 속 미생물, Rhodobacillus 속 미생물, Rhodobacter 속 미생물, Rhodococcus 속 미생물, Rhodocyclus 속 미생물, Rhodomicrobium vannielii, Rhodopseudomonas 속 미생물, Rhodospirillum 속 미생물, Schizochytrium 속 미생물 Sphingomonas paucimobilis, Spirillum 속 미생물, Spirulina 속 미생물, Staphylococcus 속 미생물, Stella 속 미생물, Streptomyces 속 미생물, Syntrophomonas wolfei, Thermophilic cyanobacteria, Thermus thermophilus, Thiobacillus A2, Thiobacillus 속 미생물, Thiocapsa 속 미생물, Thraustochytrium 속 미생물, Thiocystis violacea, Vibrio parahaemolyticus, Xanthobacter autotrophicus, Xanthomonas maltophilia, Zoogloea 속 미생물 및 오일 생성능을 가지는 효소를 코딩하는 유전자로 형질전환된 미생물로 구성된 군에서 선택된 미생물임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 4 | 제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 배양은 질소원이 제한된 배지에서 수행하는 것을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 5 | 제1항에 있어서, 상기 유리 지방산은 포화 또는 불포화 지방산인 것을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 6 | 제5항에 있어서, 상기 유리 지방산은 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리놀렌산(linolenic acid), 팔미토레익산(palmitoleic acid), 리시놀레익산(ricinoleic acid), 바세닉산(vaccenic acid), 가도레익산(gadoleic acid), 아라치도닉산(arachidonic acid), EPA (5,8, 11, 14, 17-eicosapentaenoic acid), 에루식산(erucic acid), DHA(4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid), 부타노익산(butyric acid), 카프로익산(caproic acid), 카프릴릭산(caprylic acid), 카프릭산(capric acid), 라우린산(lauric acid), 미리스트산(myristic acid), 팔미틴산(palmitic acid), 스테아린산(stearic acid), 아라키딕산(arachidic acid), 비헤닉산(behenic acid) 및 리노세릭산(lignoceric acid)으로 구성된 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 7 | 제1항에 있어서, 상기 유리 지방산은 방향족 고리기, 에폭시기, 시아노기 및할로겐기로 구성된 군에서 선택되는 치환기로 수식된 것임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 8 | 제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 자가분해는 리파아제에 의한 것임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
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| 11 | 제1항에 있어서, 상기 오일 생성능을 가지는 미생물은 Rhodococcus opacus임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
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| 13 | 제1항에 있어서, 상기 리파아제를 코딩하는 유전자는 서열번호 5, 8, 17, 18, 19 및 20으로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 염기서열을 가지는 유전자임을 특징으로 하는 지방산 알킬에스테르의 제조방법. |
| 14 | 제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 반응은 80 |
| 15 | 다음 단계를 포함하는, 오일(oil) 생성능과 리파아제를 코딩하는 유전자를 가지는 미생물을 이용한 지방산 메틸에스테르의 제조방법:(a) 오일(oil) 생성능과 트리아실 글리세롤 리파아제(triacyl glycerol lipase), 모노아실 글리세라이드 리파아제(monoacyl glyceraid lipase) 및 리소포스포리파아제(lysophospholipase)로 구성된 군에서 선택된 2 이상의 리파아제를 코딩하는 유전자를 가지는 미생물을 배양하여, 오일을 생성시키는 단계;(b) 상기 생성된 오일을 함유하는 미생물에서 리파아제에 의한 오일의 자가분해를 유도하여 유리 지방산을 생성시키는 단계; 및(c) 상기 생성된 유리 지방산에 메탄올을 첨가하고, 반응시켜 지방산 메틸에스테르를 제조하는 단계. |
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| 17 | 제15항에 있어서, 상기 트리아실 글리세롤 리파아제(triacyl glycerol lipase)를 코딩하는 유전자는 서열번호 5, 17, 18 및 19 중 어느 하나의 염기서열을 가지는 유전자이고, 상기 모노아실 글리세라이드 리파아제(monoacyl glyceraid lipase)를 코딩하는 유전자는 서열번호 8 또는 20의 염기서열을 가지는 유전자임을 특징으로 하는 지방산 메틸에스테르의 제조방법. |