▲ 1차 년도: 뇌경색질환 환자에서 next generation sequencing (NGS) 분석을 응용한 대표적 클론성 조혈 관련 유전자의 somatic mutation 분석 - 혈소판 활성화 반응의 시험관내 분석 - 단계별 검사기법의 확립 및 선별적 임상 적용 - NGS 분석을 활용한 클론성 조혈의 체세포 변이 분석 ▲ 2차 년도: 3-Dime...

(1) 혈소판 기능 검사 및 리간드의 작용: 시험관내 분석 - 혈소판 내에 존재하는 dense granule을 국내 최초로 whole mount preparation을 응용한 transmission electron microscope으로 관찰하여 정상인에서 참고치를 산정하였고, Annals of Laboratory Medicine 43권 2호에 게재하였다. - 새로운 경구 항응고제(new oral anticoagulants, NOAC)는 최근 직접 경구 항응고제(direct oral anticoagulants, DOAC)으로 불리게 되었고, 기존의 와파린 및 헤파린이 응고의 여러 단계에 작용하는 반면, 한 부분에만 관여하고, 와파린보다 훨씬 사용이 용이하고 우월한 안전성을 보여주어 국내에서는 전 세계적으로 시판되고 있는 네 가지 DOAC, 즉 dabigatran, rovaroxaban, apixaban, edoxaban의 처방이 모두 가능하다. 현재 심방세동 환자에서 뇌졸중 예방을 목적으로 하거나, 정맥 혈전증의 예방 또는 치료 목적으로 사용하고 있다. 본 연구에서는 비판막성심방세동 환자에서 신규 Biophen DiXal 및 Heparin LRT (liquid reagent technology) chromogenic assays 시약(Hyphen BioMed, Neuville Sur Oise, France) 및 Sysmex CS-5100 (Sysmex Corp., Kobe, Japan)을 사용한 분석에서 apixaban의 유효한 trough & peak levels을 보였고, 현재 논문 투고 중에 있다. (2) 세포간 상호 작용: 시험관내 분석 (NET 분석 포함) - 최근 neutrophils이 혈전형성에 중요한 역할을 하고 있음이 알려지면서, neutrophil extracellular extracts (NET)를 유리하고 NET는 혈소판 및 적혈구도 포획하여 혈관내 혈전형성의 주요 성분이 되고 있다. 본 연구에서는 뇌경색질환을 대상으로 혈중에서 NET 형성을 정량측정하여 임상 중증도, 클론성 조혈 증거 및 기타 예후인자와의 관련을 분석하고자 하며, Volition 사(Belgian Volition SRL, Rue Phocas Lejeune, Belgium)의 NuQ NETs 키트를 사용하여 분석 중이다. (3) 클론성 조혈의 증명 및 의의 (NGS 분석 포함) - 본 연구에서는 말초혈액으로부터 추출한 DNA를 사용하여 분석비용과 임상적 의의를 고려하여, 일차 적으로 DNMT3, TET2, ASXL1, JAK2 변이를 분석하고, 향후 그 유전자의 대상 범위를 넓혀가고자 한다. 본 연구를 통해, tier 1 변이로서는 급성대뇌허혈성질환(acute cerebral ischemia) 환자의 17.6%에서 확인되었으며, DNMT3A, TP53, ASXL1 변이가 주로 관찰되었고 약 5.9%에서는 tier 1 변이로서 TET2 및 STAT3 변이가 확인되어 추가 분석 중에 있다.

◇ 심혈관 질환에서 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 유무와 종류분석: 혈소판 활성화 연구와 병행함 - in vitro & ex vivo cultures - 3-Dimension bioactive hydrogel culture - 혈소판 활성화 기전 연구 - Western blotting, flow cytometry, morphology 관찰 - Cytokines, chemokines, signals analysis, platelet microparticles 분석 - Platelet function tests - 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 분석 - Somatic mutation variants 사이의 상관관계 분석 ◇ 클론성 조혈-연관 유전자 변이와 관련한 시험관 및 생체내 위험인자의 분석과 확인: 그 기전 연구 포함 - Megakaryocyte cultures - 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 분석 - 3-Dimension bioactive hydrogel culture - Neutrophil extracellular extraps (NET) 분석: PicoGreeen 및 dsDNA 분석 - Somatic mutation variants 사이의 상관관계 분석 - 혈소판 관련 연구 시험관내 모델 개발 ◇ 심뇌혈관 질환에서 클론성 조혈과 연관된 위험도 평가 모델의 제시 및 생물학적 표지자 개발 - Ex vivo platelet culture model 확립 - Platelet activation markers 상용화 - Platelet receptor ligands 작용 기전 확립 - 심혈관 질환에서 클론성 조혈-관련 위험도 평가 모델 제시 - 심혈관 질환에서 클론성 조혈-관련 생물학적 표지자 발굴 - 유사 타 질환 관련 연구 (예, 고혈압, 당뇨, 고지혈증 등) 시험관내 모델 개발

◇ 심혈관 질환에서 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 유무와 종류분석: 혈소판 활성화 연구와 병행함 - in vitro & ex vivo cultures - 3-Dimension bioactive hydrogel culture - 혈소판 활성화 기전 연구 - Western blotting, flow cytometry, morphology 관찰 - Cytokines, chemokines, signals analysis, platelet microparticles 분석 - Platelet function tests - 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 분석 - Somatic mutation variants 사이의 상관관계 분석 ◇ 클론성 조혈-연관 유전자 변이와 관련한 시험관 및 생체내 위험인자의 분석과 확인: 그 기전 연구 포함 - Megakaryocyte cultures - 차세대 염기서열분석기술을 응용한 클론성 조혈-연관 유전자 변이의 분석 - 3-Dimension bioactive hydrogel culture - Neutrophil extracellular extraps (NET) 분석: PicoGreeen 및 dsDNA 분석 - Somatic mutation variants 사이의 상관관계 분석 - 혈소판 관련 연구 시험관내 모델 개발 ◇ 심뇌혈관 질환에서 클론성 조혈과 연관된 위험도 평가 모델의 제시 및 생물학적 표지자 개발 - Ex vivo platelet culture model 확립 - Platelet activation markers 상용화 - Platelet receptor ligands 작용 기전 확립 - 심혈관 질환에서 클론성 조혈-관련 위험도 평가 모델 제시 - 심혈관 질환에서 클론성 조혈-관련 생물학적 표지자 발굴 - 유사 타 질환 관련 연구 (예, 고혈압, 당뇨, 고지혈증 등) 시험관내 모델 개발