IL-17A는 염증과 자가 면역질환에서 중요한 역할을 담당하는 사이토카인으로 알려져 있으며, IL-17RA, IL-17RC 수용체와 결합하여 세포내 신호전달이 일어나는 것으로 알려져 있음. 인간태반세포주 BeWo세포, JEG-3 세포 JAR세포주 뿐만 아니라 생쥐 primary trophoblast 세포에서 염증 반응 및 IL-17A 사이토카인 처리에 의하여 IL-17RA, IL-17RC 유전자의 발현을 qPCR 방법을 통해 조사하며, IL-17RA, IL-17RC를 통한 신호전달 메카니즘 단백질 Act1, NF-kappaB 등의 단백질 발현을 조사함. 인간태반세포주와 생쥐 primary trophoblast 세포에 LPS, Poly(I:C) 등 처리를 통한 염증 반응에 의한 세포의 사멸 및 생장 annexin-5 staining 등 실험방법을 통해 검증함. 또한 세포간의 결합력 약화에 의한 모체 IL-17A의 누출을 조사하기 위하여 세포 연접 단백질 (occludin, claudin, ZO-1 등) 발현을 조사함. transwell 실험기법을 사용하여 IL-17A의 투과성을 조사함. 인간태반세포와 생쥐 primary trophoblast 세포주를 한 층으로 계대한 후 IL-17A를 농도 의존저그 시간 의존적으로 처리하여 IL-17A의 투과성을 ELISA 기법을 사용하여 측정함. 이때 IgG는 양성대조군으로 IgM 은 음성대조군으로 사용함. 또한 염증 반응을 유도시킨 세포주에서 같은 방법으로 IL-17A의 투과성 실험을 실시함. IL-17RA siRNA를 이용하여 IL-17RA의 발현이 저해된 인간태반세포주에서 IL-17A 투과성을 같은 방법으로 조사하여, IL-17RA를 통한 신호전달 기전 단백질의 발현과 세포연접 단백질의 발현을 조사하여 IL-17A의 투과성을 검증함.
암세포에서 탈유비퀴틴효소 (DUB)의 발현이 Med1/Sp1단백질의 안정화 및 기능에 미치는 영향 연구
1) 1차년도 : Med1/Sp1의 탈유비퀴틴을 조절하는 탈유비퀴틴 효소 (DUB) 선정 및 in vitro 기능 검증 ● 암세포에서 Med1/Sp1의 유비퀴틴 조절할 수 있는 Med1/Sp1의 인산화 및 sumolyation 조사 ● DUB libray를 통하여 Med1/Sp1 단백질의 유비퀴틴을 저해하는 DUB 선정 ● 선정된 DUB를 통해 Med1/Sp1 단백질의 안정화 및 활성화 조사 ● 선정된 DUB를 통해 Med1/Sp1 전사활성화 조사하여 2) 2차년도 연구계획 : 암세포에서 Med1/Sp1을 조절하는 DUB의 역할 및 기전 연구 ●선정된 DUB를 통한 Med1/Sp1 단백질이 안정화 및 활성화 조절이 세포의 생장 및 세포사멸에 미치는 영향 조사 ● 선정된 DUB를 통한 Med1/Sp1의 암 전이에서의 기능을 세포의 이동성과 침윤성을 통해 검증 ● 선정된 DUB에 의해서 Med1/Sp1의 표적 유전자 발현을 조사 ● 선정된 DUB와 Med1/Sp1간의 상호관계를 조사 검증하여 세포내에서 조절기전을 조사 3) in vivo상에서 DUB를 통한 Med1/Sp1의 역할 규명 ● xenograft animal model을 통해 Med1/Sp1을 통한 암발생이 선정된 DUB에 의해서 암발생의 저해 및 증가 조사 ● in vivo metastasis animal model을 이용하여 Med1/Sp1 저발현에 의한 암 전이 증가가 선정된DUB에 의해서 암전이 감소를 조사 ● 생체내에서 암발생과 전이에서 Med1/Sp1 표적 단백질의 발현 조사를 통해 Med1/Sp1 단백질의 기능을 조사 ● DUB와 Med1/Sp1간의 암발생 및 전이에서의 상관관계조사 ● DUB의 저해 또는 활성화를 통해 Med1/Sp1의 기능을 조사