○ 신규 바이오마커로서 CIC 효용 가능성 평가- CIC 결핍 또는 기능 저하에 따른 고형암의 악성화 표현형 변화 관찰- 고형암종별 CIC-YAP axis 작용 확인 및 응용 가능성 평가○ CIC 조절 기전에 기반한 치료 타겟 발굴- 치료적 표적화 가능한 CIC 타겟 유전자 발굴- CIC 상위 조절 기전 확립

○ 신규 바이오마커로서 CIC 효용 가능성 평가- CIC 결핍 또는 기능 저하에 따른 고형암의 악성화 표현형 변화 관찰- 고형암종별 CIC-YAP axis 작용 확인 및 응용 가능성 평가○ CIC 조절 기전에 기반한 치료 타겟 발굴- 치료적 표적화 가능한 CIC 타겟 유전자 발굴- CIC 상위 조절 기전 확립

○ 신규 바이오마커로서 CIC 효용 가능성 평가- CIC 결핍 또는 기능 저하에 따른 고형암의 악성화 표현형 변화 관찰- 고형암종별 CIC-YAP axis 작용 확인 및 응용 가능성 평가○ CIC 조절 기전에 기반한 치료 타겟 발굴- 치료적 표적화 가능한 CIC 타겟 유전자 발굴- CIC 상위 조절 기전 확립

○ MEK-ERK 신호 활성화 측정 (ERK phosphorylation) ● 호르몬-관련 암(유방암 및 전립선암) 세포주에서 phosphorylated ERK의 단백질 발현 평가 - 유방암 세포주 (MCF7, MDA-MB-231, Tamoxifen-저항성 MCF7) 및 전립선암 세포주 (LNCaP, PC3)에서 Fetal Bovine Serum (FBS) 혹은 EGF 처치에 의한 ERK phosphorylation을 western blot analysis를 통해 확인함. - 처치 시간은 각각 5분, 15분, 30분, 1시간으로 시간 별 phosphorylation 변화를 관찰함. ● Trametinib 처치에 의한 phosphorylated ERK 발현 변화 평가 - Fetal Bovine Serum 혹은 EGF 와 함께 MEK-ERK 저해제인 Trametinib을 처치하였을 때, ERK phosphorylation의 저해 효과를 western blot analysis를 통해 확인함. ● Trametinib 처치에 의한 암세포의 proliferation, migration 및 invasion 억제 효과 평가 - 유방암 세포주 (MCF7, MDA-MB-231, Tamoxifen-저항성 MCF7) 및 전립선암 세포주 (LNCaP, PC3)를 24 시간 배양 후 농도 별 Trametinib (1 nM ？ 10 μM)을 처치함. - Trametinib 처치 48 시간, 72 시간 및 96 시간 후 Trametinib 농도별 세포의 성장 변화를 관찰함. - Transwell migration assay 시스템을 이용하여 유방암 및 전립선암의 이동능을 평가함. Upper chamber에 암세포주와 함께 Trametinib을 처치 후 18 시간 동안 배양하여 암세포의 lower chamber (FBS-containing)로의 이동을 평가함. - Invasion에 미치는 Trametinib의 영향을 평가하기 위해 matrigel이 코팅된 transwell plate를 이용하여 암세포의 이동능을 평가함. ○ Capicua(CIC)의 MEK-ERK 신호 매개체로서의 역할 평가 ● 유방암 및 전립선암 세포주에서 CIC의 mRNA, 단백질 발현 및 기능 평가 - 유방암 세포주 (MCF7, MDA-MB-231, Tamoxifen-저항성 MCF7) 및 전립선암 세포주 (LNCaP, PC3)를 이용하여 CIC의 mRNA 및 단백질 발현을 RT-PCR 및 western blot analysis를 통해 평가함. - CIC의 전사억제인자로서의 활성 및 기능을 평가하기 위해 타겟 유전자인 ETV4의 mRNA 및 단백질 발현을 평가함. ● Trametinib 처치에 의한 CIC 단백질 발현 및 기능 변화 평가 - Trametinib의 처치에 의해 CIC 및 타겟 유전자의 발현이 변하는지 확인하기 위해 CIC와 ETV4의 mRNA 및 단백질 수준의 발현을 평가함. ● CIC 발현 변화에 따른 암세포의 proliferation, migration 및 invasion 억제 효과를 in vitro 및 in vivo 모델에서 평가 - Trametinib 처치에 따른 CIC의 발현 변화가 암세포의 성장, 전이 및 항암제 저항성과 같은 악성화에 영향을 미치는지 평가하고자 함. - siRNA 또는 CRISPR-cas9 시스템을 이용하여 CIC 발현 및 기능을 저해하였을 때, 암세포의 proliferation, migration 및 invasion이 증가되는지 평가하고자 함. - 반대로, CIC 과발현 plasmid를 이용하여 CIC 발현 및 기능을 증폭시켰을 때, 암세포의 proliferation, migration 및 invasion이 억제되는지 평가하고자 함. - 최종적으로 in vivo xenograft 마우스 모델에서 Trametinib 처치에 의해 CIC 발현이 증가되고 암의 성장이 억제될 수 있는지 평가할 수 있음.