선행연구를 통해 인간배아줄기세포와 간암세포에 잘 결합하고 정상 간세포에서는 결합하지 않는 단일클론항체63-D7를 제조하고 63-D7항원이 PTGFRN임을 밝혔으며, 96%의 간암환자 혈중암세포 (CTC)에서 PTGFRN을 검출하였음. 이 연구 제안서를 통해 간암의 높은 전이/재발률이 CTC의 PTGFRN 발현을 통한 생존 유지, EMT, 면역 회피에 기인하...

1차년도: 간암의 PTGFRN 표적하는 항체 63-D7 제조 및 PTGFRN의 생존 및 면역 회피 기전 규명 -간암환자 CTC를 표적하는 항체 63-D7 선발과 표적 항원 PTGFRN 확인과 검증. -간암세포에서 PTGFRN siRNA 및 CRISPR/Cas9 knockout 세포주 제조. -PTGFRN 결핍 간암세포에서 PTGFRN 신호전달분석. -PTGFRN 결핍세포에서 MVP, 면역조절분자 (PD-L1/L2, B7-H3, TGFβ1, CD47, MICA/B) 발현분 석 2차년도:PTGFRN의 간암세포 침입,이동,생존 및 면역회피분석 및 63-D7의 간암세포사멸 유도분석 -63-D7양성/음성세포에서 serum starvation, survival, chemoresistance, migration, invasion 분석. -63-D7처리한 간암세포에서 PTGFRN의 internalization 측정 및 ADC 분석 (인간 키메라항체 제조 및 분리). -63-D7 처리한 간암 세포에서 NK cell의 cytotoxicity 및 ADCC 분석 (인간 키메라항체 사용). -63-D7 처리한 간암 세포에서 T cell의 cytotoxicity 촉진 분석 (인간 키메라항체 사용). 3차년도:CTC에서 PTGFRN의 면역 회피, 전이, 재발 연관성과 간암 실험동물에서 63-D7 항체의 항암 능력 평가 . -63-D7로 전이/재발한 간암 환자에서 PTFGRN발현 CTC 수 측정 (100명 이상, 정상인 20명 이상) -간암환자 CTC에서 PTGFRN, MVP, 면역조절분자 (PD-L1/L2, B7-H3, TGFβ1, CD47, MICA/B) 발 현분석. -간암환자에서 PTGFRN 발현 CTC 수와 환자의 전이/ 재발 관련 임상병리학적 특성 분석. -누드마우스에서 간암세포 이식을 통한 간암 질환 모델 제작. -생쥐 간암모델에서 63-D7 항체의 항암 능력평가 (생쥐 또는 인간 IgG1 키메라항체 사용)

1. 간암세포에서 63-B6, NPB40 항체로 양성/음성 세포를 sorting 후 serum starvation, survival, chemoresistance, migration, invasion에서 차이를 분석함. 2. 63-B6, NPB40 항체의 인간 키메라 항체를 제조하고 항체를 처리한 간암세포에서 NK cell의 ADCC를 통한 암세포 사멸을 분석함. 3. 63-B6, NPB40 처리한 간암세포에서 B7-H3를 중화시킴으로써 NK 세포의 cytotoxicity 활성을 증가 시킬수있는지 분석함.

- 컴퓨터를 이용한 TM4SF4 항체 분자 모델링 - TM4SF4 항체 epitope와 paratope의 docking 모델 확립 - TM4SF4 항체의 CDR 또는 SDR 이식을 통한 인간화 항체의 고안 - HEK293F에서 인간화 항체 과도발현 확립 및 임시 인간화 항체의 특성 분석 - Back mutation과 과도 발현을 통한 인간화 항체 최적화 - 인간화 항체에 의한 방사선 민감성 유도 및 암 억제 효과 분석 - 최적화 인간화항체의 대량 생산 CHO 동물세포 주 개발 - CHO세포주에서 인간화 항체 정제 및 생물학적 특성 분석