PDF 파일 - 2.3MB, STC에 의한 산성 및 중성 SMase의 활성화는 Fas 및 caspase-8의 활성화와 무관하다. (A) HL-60 및 K562 세포를 각각 desipramine 또는 GW4869의 유무 하에 STC(각각 0.3 μM 또는 0.5 μM)와 함께 2시간 동안 배양한 후 고정하였다. 투과화(permeabilization) 후, 시료를 재료 및 방법에 기재된 바와 같이 PE-anti-Fas 및 FITC-anti-ceramide 항체로 염색하였다. 그림은 5개의 독립적인 실험 결과를 대표한다. 좌측 패널은 A와 동일하게 처리한 HL-60 세포의 고배율 확대상을 보여준다. 우측 패널은 A와 동일하게 처리한 K562 세포의 고배율 확대상을 보여준다. (B) 병행하여, desipramine 또는 GW4869의 유무 하에서 STC로 6시간 처리한 HL-60 및 K562 세포의 전체 용해물을 준비하고, 재료 및 방법에 기재된 바와 같이 Western blot으로 분석하였다. 각 경우에서 단백질 30 μg을 SDS-PAGE로 분리한 후, 해당 항체로 blot을 프로빙하였다. 이후 blot을 스트리핑(stripped)하고, 등량의 로딩과 전이를 보장하기 위해 beta-actin에 대한 항체로 재프로빙하였다. (C) HL-60 및 K562 세포를 48시간 동안 전기천공(electroporation)으로 무처리(none, shock), 비특이적 대조군(NC) siRNA, 산성 SMase(ASM)용 siRNA, 또는 중성 SMase(NSM)용 siRNA를 각각 일시적으로 형질도입하였다. 배양 배지를 교체한 뒤, 세포에 대해 STC(각각 0.3 μM 또는 0.5 μM)를 처리하거나 처리하지 않고 6시간 동안 처리하였다. 단백질 용해물을 준비하고, 재료 및 방법에 기재된 바와 같이 해당 항체를 사용하여 Western blot 분석을 수행하였다. 동일한 단백질 로딩은 beta-actin 발현의 균일성을 확인함으로써 보장하였다. blot은 5개의 독립적인 실험 결과를 대표한다.

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