▶ 1년차 1) 담관결찰술을 이용한 간성뇌증 마우스 모델 개발 및 판별법 구축 - 담관결찰술 7, 14, 21일 후 간기능 및 간조직 검사: 간경화 발생 확인 - 담관결찰술 7, 14, 21일 후 신경행동검사 및 전기생리학 검사: 간성뇌증 판별법 구축 2) 간성뇌증 마우스 모델에서 병태생리 기전(NLRP3 인플라마좀 역할) 규명 - 뇌와 혈청에서 NLRP3, ASC, Caspase-1, IL-1β, IL-18 활성화 확인 - 뇌염증(microglia 활성화, leukocyte 침윤) 및 세포사멸(pyroptosis, apoptosis) 확인 - 혈액뇌장벽 손상 확인: 분자생물학적 방법 및 뇌영상 기법 3) 인플라마좀이 간성뇌증의 병태생리 기전임을 확증 - NLRP3 또는 Caspase-1 선택적 억제제를 담관결찰술 당일부터 14일까지 복강 투여 후 신경행동검사 및 전기생리학 검사 시행 - NLRP3 유전자 결손 마우스(Nlrp3−/−)에서 담관결찰술 14일 후 신경행동검사 및 전기생 리학 검사 시행 ▶ 2년차 1) 간성뇌증 마우스 모델에서 덱스메데토미딘(DEX)의 적정용량 결정 - DEX의 여러 용량에서 뇌와 혈청의 NLPR3 인플라마좀 억제 효과 비교 2) DEX의 뇌보호 효과 확인 - 뇌염증(microglia 활성화, leukocyte 침윤) 및 세포사멸(pyroptosis, apoptosis) 억제 효과 - 혈액뇌장벽 보전 효과: 분자생물학적 방법 및 뇌영상 기법 3) DEX의 증상 호전 효과 확인 - 신경행동검사 및 전기생리학 검사 4) DEX와 NLRP3 또는 Caspase-1 선택적 억제제의 효능 비교 ▶ 3년차 1) 간성뇌증 모방 뇌세포(BV-2 microglial cell, primary microglia) 모델 구축 - 다양한 농도의 암모니아를 처리하여 간성뇌증 모방 환경 설정 2) 간성뇌증 모방 뇌세포 모델에서 DEX의 적정농도 결정 3) 간성뇌증 모방 뇌세포 모델에서 DEX의 인플라마좀 억제 효과 확인 - NLRP3-siRNA기법을 사용하여 DEX의 효과와 비교 4) 간성뇌증 모방 뇌세포 모델에서 DEX의 신경세포 보호 효과 확인 - Transwell co-culture system을 이용하여 neurotoxicity 측정 5) 간성뇌증 모방 뇌세포 모델에서 DEX의 인플라마좀 억제 기전 규명 ▶ 2-3년차 1) 간성뇌증을 동반한 간이식 환자의 혈액에서 인플라마좀 표지자(Caspase-1, IL-1β, IL-18) 를 측정하여 인플라마좀 활성화와 간성뇌증 중증도와의 상관관계 확인 2) 주술기 동안 DEX를 지속 주입한 실험군과 대조군의 간이식 후 간성뇌증 호전 비교