(1) 1년차 지방축적 간세포 유발 엑소좀에서 간섬유화 유발 및 촉진 인자로서 가능성이 높은 miRNA를 선별함. 지방축적 간세포 유발 엑소좀으로 처리한 간성상 세포주에서 섬유화 및 간경변증 유발과의 연관성을 규명함. 지방축적 간세포 유발 엑소좀으로 처리한 간세포암주에서 악성 세포로서의 형질 획득 연관성을 규명함. Microarray 및 proteome 분석을 통하여 가장 최종 단계의 단백과 중간 전달 신호체계에서의 연관관계를 규명함. 비알코올성 지방간 환자의 간조직, 혈청 및 혈장, 백혈구, 분변 등의 검체를 획득함.비알코올성 지방간 질환의 동물 모델을 확립함. (2) 2년차 비알코올성 지방간 질환의 동물 모델에서 1년차 연구에서 얻어진 인자들의 임상적 의의를 규명함. 비알코올성 지방간 환자의 검체를 이용하여 1년차 연구에서 얻어진 인자들의 임상적 의의를 규명함. 비침습적 영상 진단인 간섬유화 혈청 검사, transient elastography, MRE와의 연관관계를 분석함. (3) 3년차 목표 비알코올성 지방간 동물 모델과 임상 환자에서 시간 경과에 따른 질환의 자연 경과에 미치는 exosome의 역할을 규명함 비알코올성 지방간 동물 모델에서 지방간, 지방간염, 간경변증 유발에 따른 치료적 개입 등의 시간적 변화에 따른 간경변증 및 간섬유화의 변화를 관찰함. 1년차 연구에서 모집한 비알코올성 지방간 환자를 3년차에 다시 추적하여 얻어진 검체를 이용하여 치료적 개입, 생활 습관의 개선, 대사질환의 수정 또는 변경 등의 시간적 변화에 따른 간경변증 및 간섬유화의 변화를 관찰함. 간섬유화의 변화에 대한 엑소좀 miRNA, 단백과의 연관관계를 분석함 간암환자의 검체를 이용하여 간암발생과의 연관성을 규명함. 이를 위하여 다음과 같은 연구방법을 사용함. 1) Hepatoma cell line and palmitic acid (PA) treatment: 간세포주에 PA 처리를 하여 exosome을 분리함. 2) Patients: sera, WBC 와 간조직등을 연구 시작 전과 연구 시작 3년 후 (치료적 개입 전후) 수집함. 얻어진 검체에서 엑소좀을 분리하여 각가의 방법으로 miRNA,단백발현, 신호전달 체계의 변화를 관찰함. 3) Exosome의 분리 및 counting: 세포주와 환자의 혈청에서 exosome을 분리하고 counting함. 4) NAFLD 동물 모델의 확립 및 mouse cell isolation, culture: NAFLD 동물 모델에서 간조직, 혈청, WBC 등을 연구 시작전과 치료적 개입 후 얻고, 이들의 간에서 간세포를 분리함. 5) Microarray: exosome에서 분리한 total RNA를 이용하여 miRNA에 대한 vehicle treated 혹은 PA treated hepatocyte exosome의 발현양상을 비교함. 6) Western blot analysis: CD9, CD63 및 exosome 분석 후 의미있는 단백발현의 양상을 비교함. 7) Hepatic stellate cell에 exosome 처리: PA treated hepatocyte 유래 exosome이 간섬유화에 미치는 영향을 분석하기 위하여 일정농도 및 일정시간의 exosome 처리를 한 후 간섬유화 관련 신호전달 체계와 유전자의 발현양상을 비교함. 8) Hepatic stellate cell에 의미 있는 miRNA transfection: target miRNA를 hepatic stellate cell에 transfection 시켜 간섬유화 관련 신호전달 체계와 유전자의 발현양상을 비교함.