◦ 코니페린과 시린진 대량 생산용 다중 유전자 발현 벡터의 제작 ◦ UGT와 조합된 MYB 유전자들이 과발현하는 형질전환체 선발 및 순계 확보 ◦ 무균 기내수경재배로 우수 형질전환체 대량 증식 및 코니페린과 시린진 대량 추출 ◦ Tyrosinase, Collagenase, Elastase 효소 활성 억제능력 조사 ◦ 세포사멸을 최소화하기 위해서 DAMP 신호전달 결손 돌연변이체 활용 ◦ 80% 이상의 순도로 코니페린과 시린진 대량 분리와 세포 수준에서 기능 검증

❍ 시너지 효과 위한 UGT와 MYB 유전자들을 조합한 코니페린과 시린진 생산용 다중유전자발현 벡터 제작 - 재조합 당전이 효소 유전자 UGT72E2/3-1과 UGT72E2/3-2, 리그닌 생화합 경로를 특이적으로 조절하는 MYB63 유전자, 쉬키메이트 합성경로를 조절하는 MYB12 유전자를 각각 단일 T-DAN 영역에 유전자 발현 카세트 모듈형식으로 복수로 도입하여 다중유전자발현 벡터 완성 ❍ 형질전환체 제작 및 전이유전자 과발현 형질전환체 선발 - UGT는 카르복시 말단에 Myc epitope이 부착된 유전자를 사용하며 제초제 저항성으로 1차 선발된 T1 형질전환체들 중에서 western blot 방법으로 UGT 단백질 발현이 높은 라인들을 확인하고 다음세대에 순종을 확보하여 코니페린과 시린진의 생산성을 HPLC로 확인 ❍ 선발된 형질전환체의 전체 전사체 분석과 페닐프로파노이드 대사체 분석 - 페닐프로파노이드 합성 경로에 관여하는 유전자들의 발현량과 대사체 생성량이 도입된 MYB 전사인자의 발현량과 상관관계가 있음을 조사하기 위해 UGT 유전자의 발현이 높고 코니페린과 시린진 생산량이 우수한 형질전환체의 RNA-seq 분석과 대사체 분석 ❍ 무균 기내수경재배를 통한 코니페린과 시린진 대량생산용 형질전환체 대량 증식 - Damage Associated Molecular Pattern (DAMP) 신호전달을 결손 돌연변이체에 활용하고, 세포사멸을 유도하는 외부적 요인을 최소화하기 위해 무균상태 기내수경재배를 하면 바이오메스를 충분히 증식 시킬 수 있음 ❍ 코니페린과 시린진의 대량 추출과 순수 분리 - 생산된 선발된 형질전환체 1 Kg을 건조, 분쇄, 유기용매로 추출 후, 실리키켈과 Sephadex LH-20 관 크로마토그래피를 사용하여 코니페린과 시린진을 80% 이상의 순도로 각각 분리할 수 있는 시스템 확립 ❍ 코니페린의 피부 미용 관련 효소 활성 저해 능력 조사 - Collagenase, Elastase, Tyrosinase 활성 측정용 키트를 구입하여 코니페린를 다양한 농도로 첨가하면서 효소 활성을 측정하면 이들 효소 제해제로서 코니페린의 작용기작을 이해한다. ❍ 분리 된 코니페린과 시린진의 동물 세포주를 이용한 약리적 기능성 검증 - 세포배양 전문가와 협업하여 쥐의 B16 melanoma와 neuroblastoma 세포주 배양액에 다양한 농도의 코니페린을 첨가한 후 세포 수준에서 생성되는 멜라닌 총량과 amyloidβ peptide에 의한 신경세포 사멸 억제 능력을 측정함으로써 미백 효과와 신경세포 보호 효과를 검증한다.