<선행연구 결과> ○ 오렉신 A가 간세포에서 중성지방 축적을 억제함을 확인함 ○ 오렉신 A의 자가포식 유도 효과를 확인함 <연구가설> 본 연구팀은 상기 연구결과들을 토대로 오렉신 A가 간세포에서 자가포식을 유도함으로써 중성지방 분해 및 지방산 산화를 통해 지방간을 예방/치료할 수 있을 것으로 생각하고 있음. <연차별 연구내용 및 방법> (1) 1차년도 ○ 오렉신 A가 간세포 지질대사의 주요 경로에 미치는 영향 확인 - 간세포에 oleic acid를 처리하여 중성지방 축적을 유도하는 세포모델에서, 오렉신 A가 간세포 지질대사의 주요 경로에 관련된 유전자의 발현을 real-time PCR 또는 western blot analysis로 확인할 것임. - 본 연구팀이 주목하고 있는 지방산 산화에 대한 평가를 위해 seahorse metabolic analysis를 시행할 예정임. ○ 오렉신 A의 자가포식 유도 효과 규명 - 간세포에서 오렉신 A의 자가포식 유도 작용 확인 ▶ Western blot analysis: LC3B/p62, autophagic flux 평가를 위해 chloroquine 처리 ▶ RFP-GFP-LC3 puncta 확인 ▶ GFP-LC3 cleavage assay ▶ 전자현미경으로 autophagosome/autophagolysosome 확인 (2) 2차년도 ○ 오렉신 A의 간세포 지방축적 예방효과에서 자가포식의 중요성 규명 - ATG7 knockdown 또는 자가포식 억제제 처리를 통해 자가포식을 억제한 후에, 오렉신 A의 간세포 지방축적 예방효과에 미치는 영향 확인 - ATG7 knockdown 또는 autophagy inhibitor 처리를 통해 자가포식을 억제한 후에, 오렉신 A의 지방산 산화 유도효과에 미치는 영향 확인 ○ 오렉신 A의 자가포식 유도 기전 규명 - 오렉신 A 수용체를 차단했을 때 오렉신 A의 효능변화를 확인하여 수용체 의존성 확인 - 오렉신 A가 자가포식을 유도하는 신호전달체계 규명 (3) 3차년도 ○ 비알콜성 지방간 동물모델에서 오렉신 A의 치료효과 규명 - 마우스에 고지방식이를 섭취시켜 비알콜성 지방간을 유도하는 동물모델을 사용 ○ 오렉신 A의 지방간 치료효과에서 자가포식의 중요성 규명 - 자가포식 억제제 투여에 의해 오렉신 A의 지방간 치료효과가 억제되는지를 확인하여 자가포식의 중요성 확인