1. 말초신경 변성에서 슈반세포 형질변환 연구: 말초신경 손상 후 축삭 Sarm1-NAD 대사물에 의한 슈반세포 형질변환의 분자기전과 신경재생에서의 중요성을 규명2. 말초신경 재생에서 슈반세포 세포외소포 연구: 형질변환된 슈반세포에서 신경재생 및 대식세포 활성화 인자들의 세포외소포 의존적 분비기전과 신경재생에서의 중요성을 규명

1. 말초신경 변성에서 슈반세포 형질변환 연구: 말초신경 손상 후 축삭 Sarm1-NAD 대사물에 의한 슈반세포 형질변환의 분자기전과 신경재생에서의 중요성을 규명2. 말초신경 재생에서 슈반세포 세포외소포 연구: 형질변환된 슈반세포에서 신경재생 및 대식세포 활성화 인자들의 세포외소포 의존적 분비기전과 신경재생에서의 중요성을 규명

유전성 말초축삭병증 Charcot Marie Tooth disease 2B 의 생쥐모델을 제작하여 원인유전자인 Rab7A 돌연변이에 의해 발생하는 축삭병증의 발병기전을 개체수준과 세포수준에서 규명하고 치료표적을 제시함

● 1차년도 연구목표: 감각신경절 신경세포 특이적 발현 AAV를 활용하여 다섯 개의 병적 Rab7A 돌연변이에 대한 말초신경병증 모델을 제작하고 표현형을 분석함 연구내용) 1. Rab7A 병적 돌연변이 5개(환자 Genotype/phenotype 기반)/Wild type Rab7A (음성대조군/과발현 비특이표현형 대조군)의 AAV 바이러스제작 및 개체수준 감각신경절 신경세포 특이적 과발현 (선행연구,연구방법 참조) 2. 바이러스 과발현 생쥐의 말초신경병증 표현형 연구 -말초신경병증 행동분석, 전기생리분석, 신경형태 전자현미경 분석 및 생화학 분석 3. 확립된 AAV생쥐모델에서 Rab7A 돌연변이에 의한 세포수준의 기능이상 연구 - 생쥐모델로부터 얻은 후근신경절 감각신경세포 배양에서 축삭 성장, 변성, 재생 연구 - 배양된 후근신경절에 Rab7A 돌연변이 AAV 감염후 축삭변성 유도연구 - 배양된 후근신경절에 ROS등 스트레스 조건에서 Rab7A 돌연변이 과발현에 의한 축삭변성 유도 연구 4. Rab7A-dominant negative (T22N)과 constitutive active (Q67L) 형의 AAV를 이용하여 동물모델을 제작함 - 환자 Rab7A 돌연변이의 말초신경병증 유발에서 Rab7의 기능항진 (Gain of function)/ 기능감소 (loss of function)의 기여 규명 ● 2차년도 연구목표: 확립된 CMT2B 생쥐모델에서 감각신경병증 병태생리 기전의 해석- Rab7A 돌연변이의 기능항진 혹은 감소에 의한 감각신경절 신경세포 오토파지 변화 연구 연구내용) 1. 확립된 CMT2B AAV생쥐모델에서 Rab7A 돌연변이에 의한 개체수준의 오토파지 기능이상 연구 - 확립된 생쥐모델에서 오토파지 관련 생화학적, 축삭 미세형태 변화 관찰 - 감각신경절 특이적 오토파지 결손생쥐의 말초신경 형태/생화학적 표현형과 비교연구 2. 후근신경절 감각신경세포 배양에서 축삭의 오토파고좀 형성, 미토파지, 리소좀의 이동 등에 관한 Rab7A 돌연변이의 영향 연구 3. 확립된 CMT2B AAV생쥐모델에서 오토파지 유도 약물에 의한 말초병증 극복 가능성 연구 ● 3차년도 연구목표: 확립된 CMT2B 생쥐모델에서 Sarm1 의존성 축삭변성 연구 연구내용) 1. 확립된 Rab7A 돌연변이 AAV생쥐모델에서 Sarm1 의존성 축삭병증이 나타나는지를 연구함 - Sarm1 유전자 결손생쥐와 대조군 생쥐에서 Rab7A 돌연변이 AAV에 의한 말초감각병증 발생비교 2. 확립된 Rab7A 돌연변이 AAV생쥐모델과 배양 감각신경절 신경세포에서 축삭변성 분자기전연구 - Rab7A 돌연변이 AAV생쥐모델에서 Sarm1 조절자인 NMNAT2 의 축삭발현양 연구 - Rab7A 돌연변이 AAV생쥐모델의 축삭과 감각신경절에서 ROS 생산량의 변화 연구 - 배양된 후근신경절에 Rab7A 돌연변이 과발현에 의한 Sarm1 활성화의 분자기전 연구 - 배양된 후근신경절에 Sarm1 기능억제 후 Rab7A 돌연변이에 의한 축삭변성 유도연구