연구 목표: 암세포 특이적 생물제제를 발현하는 차세대 CAR T cell 치료제 개발- Chimeric Antigen Receptor (CAR) T cell 치료제는 일부 환자에서 높은 항암 효능을 보였지만, 여전히 많은 환자 에서 저하된 항암 효능 또는 암재발등의 문제를 나타냄. 따라서 CAR T cell 치료제의 항암 효능 개선은 필수적이 연구 과제임....

연구 목표: 암세포 특이적 생물제제를 발현하는 차세대 CAR T cell 치료제 개발- Chimeric Antigen Receptor (CAR) T cell 치료제는 일부 환자에서 높은 항암 효능을 보였지만, 여전히 많은 환자 에서 저하된 항암 효능 또는 암재발등의 문제를 나타냄. 따라서 CAR T cell 치료제의 항암 효능 개선은 필수적이 연구 과제임....

연구 목표: 암세포 특이적 생물제제를 발현하는 차세대 CAR T cell 치료제 개발 - Chimeric Antigen Receptor (CAR) T cell 치료제는 일부 환자에서 높은 항암 효능을 보였지만, 여전히 많은 환자에서 저하된 항암 효능 또는 암재발등의 문제를 나타냄. 따라서 CAR T cell 치료제의 항암 효능 개선은 필수적이 연구과제임.-...

본 연구의 목표인 암세포 특이적 생물제제 개발을 위해서는 1) 암세포의 특정 수용체를 효과적으로 타겟하는targeting moiety 선별과 2) payload인 생물제제(단백질, 펩타이드등)의 구조적/기능적 변형 유도 없이 타겟 세포내 안정적인 전달이 필수적임. - 이를 위하여, 본 연구는 대표적인 B 세포 바이오마커인 CD79b를 타깃하는 anti-CD79b scFv를 생물제제의 암세포 특이적 전달을 위해 사용하고자 함. CD79b는 B cell receptor (BCR) associa ted molecule로써 B세포를 제외한 세 포에서 발현이 결핍되거나 제한적임. 또한, CD79b는 BCR-항원 결합체의 세포내 이입을 유도하며 B cell 활성화 신호 전달에 중요한 역할을 수행함으로써 B세포 림프종의 생존 및 성장에 필수적인 인자임. 따라서 다양한 B세포 림프종에서 CD79b는 높게 발현되고 이는 CD79b가 세포자멸사 생물제제를 림프종 세포에게 전달하기 위한 최적의 타겟임을 증명함. - 추가적으로 본 연구를 통해 개발하고자 하는 암세포 특이적 생물제제 전달 플랫폼은 수용체 매게 세포내 이입 (Receptor mediated endocytosis)을 통해 생물제제(단백질, 펩타이드등)를 암세포 특이적으로 전달함. 수용체 매게 세포내 이입은 수용체를 통한 특이적인 전달이라는 큰 장점이 있는 반면,리소좀에 포함된 많은 단백질분해 효소에 의해 세포내 이입 과정 중 생물제제의 구조 및 기능적 변형을 유도할 수 있고 이는 생물제제의 생물학적 활성 손실을 초래 할 수 있음. 이와 같은 문제점을 극복하기 위하여, 본 연구는 세포 투과 펩타이드를 암세포 특이적 생물제제내 삽입하고자 함. 이를 통해, 생물제제의 엔도솜 탈출 (endosome escape)을 효과적으로 유도하고 나아가 생물제제의 구조/기능 변화를 최소화 하고자 함. - 본 연구의 핵심 연구 추진 전략으로는 1) 림프종을 특이적으로 인지하고 세포내 이입을 유도하는 최적의 anti-CD79b scFv 선 별과 2) 생물제제의 구조/기능 변화없이 엔도솜 탈출을 효과적으로 유도할 수 있는 최적의 세포투과펩타이드 선별이 있음. - 이를 위하여, 총 5종류의 anti-CD79b 항체(클론 명칭 Polatuzumab, SN8, 4447, 4450, 2F2)를 scFv 제작 및 anti-CD19 CAR+ 인간 T cell line인 jurkat cell에서 발현하여 최적의 anti-CD79b scFv 선별하고자 함. 평가 요소는 다음과 같음. 발현량, CD79b와의 결합친화도, 수용체 매게 세포이입 유도능력. - 또한 최적의 세포투과펩타이드를 선별하기 위하여, 다양한 특징을 가진 세포투과펩타이드 중 선행 연구에서 높은 엔 도솜 탈출 효능을 보인 TM ab4, TAT, Gly-Phe-Trp-Phe-Gly을 선별된 anti-CD79b scFv와 함께 우선적으로 평가함. 추 가적으로 cationic, amphipathic, hydrophobic 특징을 가진 다양한 세포투과펩타이드를 암세포 특이적 생물제제 플 랫폼에 삽입해줌으로써 최적의 세포투과펩타이드를 선별하고자 함. - scFv 및 세포투과펩타이드 최적화 후 bcl-2 binding peptide를 플랫폼에 삽입함으로써 최종 암세포 특이적인 생물 제제 플랫폼을완성함. 이를 primary human CAR T cell에서 발현하고 항종양 효능을 평가함. 평가요소는 다음과 같 음. In vitro 항종양 활성 평가: 세포 독성 효과, 사이토카인 발현, CAR T cell 증식 능력. In vivo 항종양 활성 평 가: 면역 결핍 NSG 마우스 사용 암세포 성장 지연 평가, CAR T cell 증식 능력 - 최종적으로 본 연구는 세포 특이적 생물제제 플랫폼의 다각화를 위하여, 다양한 암세포 targeting moiety를 평 가하고, 세포자멸사을 유도 할 수 있는 다양한 payload 를 평가하고자 함.