/mL, 감염 후 6일째. 북미로부터의 바이러스의 대륙 간 전파는 한국에서 지속적으로 존재할 수 있으며, 따라서 토착 거주 AIV와의 바이러스 재조합을 위한 지속적인 기회를 제공한다; 이러한 결과는 새로 분리된 균주의 숙주 점프 능력이 증가할 잠재적 위험을 시사한다. 본 연구 결과는 한국뿐 아니라 알래스카의 비행 경로(flyways) 전반에서도 정기적인 감시가 요구됨을 뒷받침한다.

/대한민국/KNU18-64/2018(H1N1) 및 WKU19-4(A/야생조류/대한민국/WKU19-4/2019(H1N1). 계통발생학적 분석 결과, KNU18-64(H1N1) 분리주의 M 유전자는 알래스카 조류 인플루엔자 바이러스와 유사한 반면, WKU19-4(H1N1)는 몽골 바이러스와 더 가까운 것으로 나타났다. 분자 특성화 결과, 이들은 아미노산 서열 PSIQRSGLF를 보유하며, 저병원성 인플루엔자 바이러스인 것으로 확인되었다. 특히 두 분리주는 서로 다른 3개의 변이 부위를 공유하고 있어, 서로 다른 병원성 특성을 지니는 것으로 시사된다. WKU19-4(H1N1)의 PB1-F2 및 PA 단백질에서의 변이는 중합효소 활성이 증가함을 나타낸다. 이러한 결과는 MDCK 세포에서 WKU19-4의 역가 증가에 관한 운동성 성장 데이터와도 일치하였다. 즉, 접종 후 12시간 시점에서 대조군 H1N1(CA/04/09(pdm09))과 비교하여 바이러스 역가는 극적으로 증가하였다. KNU18-64(H1N1) 분리주는 포유류 적응 증가를 시사하는 변이를 지니고 있으며, 이러한 특성은 마우스에서의 동물 실험으로 확인되었다. KNU18-64(H1N1) 군에서는 감염 후 3일 및 6일째에 각각 2.71 ± 0.16과 3.71 ± 0.25 log10(TCID50/mL)의 역가로 폐에서 바이러스가 존재하는 것이 관찰된 반면, WKU19-4(H1N1) 군에서는 감염 후 6일째에만 바이러스가 검출되었고 역가는 더 낮은 2.75 ± 0.51 log10(TCID50/mL)였다. 본 연구는 한국과 미국 간 재분절(reassortment)을 통해 새로운 바이러스 균주가 생성되는 것과 관련성이 있다는 이론을 뒷받침한다. 따라서 한국의 자유 비행 및 야생 지상 조류에서, 특히 알래스카 및 아시아 계통에 대한 인플루엔자 바이러스 유행의 감시를 강화할 필요가 있다.

마이크로RNA 375(MIR375)는 사람의 대장암(CRC) 조직에서 유의하게 하향 조절된다. 우리는 이전에 MIR375를 결장암 관련 마이크로RNA(miRNA)로 확인한 바 있다. MIR375 과발현 세포의 mRNA 마이크로어레이 분석 데이터와 공개 생물정보학 도구가 예측한 후보 MIR375 표적 유전자를 비교함으로써, 추정 MIR375 표적 유전자를 확인하였다. 우리는 연골형성조직성장인자(connective tissue growth factor, CTGF)가 MIR375의 직접 표적 유전자임을 확인하였다. 표피성장인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFR)의 리간드인 CTGF의 발현은, 해당 정상 결장 조직과 비교하여 사람의 CRC 조직에서 현저하게 증가되어 있었다. 우리는 대장 세포에서 EGFR 신호전달 경로의 분자들의 발현 수준이 MIR375에 의해 조절됨을 입증하였다. 면역조직화학 및 마우스에서의 MIR375 과발현 대장 세포 이종이식(xenograft)을 이용하여, MIR375가 결장 세포에서 세포 성장 및 증식, 혈관신생, 세포 이동, 세포주기 정지, 아폽토시스(apoptosis), 괴사(necrosis)를 조절함을 보였다. 또한 MIR375 과발현과 세툭시맙(cetuximab) 치료의 결과는 결장 세포에서 아폽토시스와 괴사가 상승적으로(시너지적으로) 증가됨을 시사하였다. 본 연구 결과는 MIR375의 하향 조절이 CTGF 발현 증가를 통해 사람의 대장 세포 및 조직에서 EGFR 신호전달 경로를 조절함을 보여주며, 따라서 MIR375는 사람의 CRC와 관련하여 치료적 가치가 있을 수 있음을 시사한다.

배경 및 목적: miRNA는 비단백질-코딩(non-coding) RNA로서, 특정 세포 또는 조직에서 표적 유전자 발현을 조절함으로써 사람 질환의 병인 과정에서 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 궤양성 대장염 [UC]과 관련된 miRNA를 검출하고, 그 표적 분자를 규명하며, 결장직장 세포와 dextran sulphate sodium [DSS]로 유도된 마우스 대장염에서 miRNA와 표적 유전자 간의 상관관계를 분석하고자 하였다. 방법: UC 관련 miRNA는 DSS로 유도된 대장염 및 정상 결장 조직을 이용한 miRNA 마이크로어레이 분석으로 동정하였다. 결과는 정량적 실시간 중합효소 연쇄반응 [RT-PCR]으로 검증하였다. 우리는 MIR429 과발현 세포에서의 mRNA 마이크로어레이 분석을 예측 후보 표적 유전자와 비교함으로써, 대장염 관련 miRNA인 MIR429의 표적 유전자를 스크리닝을 통해 확인하였다. MIR429이 표적 유전자 발현에 미치는 영향을 확인하기 위해 루시퍼레이스 리포터 플라스미드를 구성하였다. 표적 유전자의 단백질 발현은 western blot, 효소면역측정법(enzyme-linked immunosorbent assay [ELISA]) 분석 또는 면역조직화학으로 측정하였다. 결과: 우리는 37개의 DSS 유도 대장염 관련 miRNA를 확인하였다. DSS 유도 대장염에서 하향조절되는 MIR429을 조사하였고, MIR429의 41개 표적 유전자를 확인하였다. MIRCKS가 MARCKS의直接 표적임을 보여주었다. 즉, MARCKS mRNA 및 단백질 발현 수준은 MIR429에 의해 하향조절되며, MIR429는 결장직장 세포와 DSS 유도 대장염에서 MARCKS 및 MARCKS 매개 점액 분비의 발현을 조절한다. 또한 항-MIR429는 결장직장 세포주에서 MARCKS 발현을 상향조절하였다. 결론: 본 연구의 결과는 MARCKS 발현을 상향조절함으로써 MIR429가 사람 결장직장 세포 및 마우스 대장염 조직에서 점액 분비를 조절하여, MIR429가 사람 UC에서의 항대장염 치료의 후보가 될 수 있음을 시사한다.

miRNA 마이크로어레이 분석을 통해 대장암 조직에서 유의하게 상향 또는 하향 조절된 31개의 miRNA를 확인하였다. 우리는 대장암에서 특이적으로 상향 조절되는 MIR196B를 추가 연구를 위해 선택하였다. MIR196B 과발현 세포에서 하향 조절된 mRNA와 공개 생물정보학 도구로 예측된 MIR196B 표적 유전자 간의 비교를 통해, MIR196B의 추정 표적 유전자 18개를 확인하였다. 본 연구에서 MIR196B와 FAS의 연관성을 검증하였다. FAS 발현은 정상 사람 결장직장 조직에서 지속적으로 높게 나타났으나, 사람 결장직장암에서는 종종 발현이 감소하였다. FAS 발현의 감소는 결장직장암 세포에서의 아폽토시스(apoptosis) 감소를 유발할 수 있다. 결장직장암 조직에서, MIR196B의 상향 조절은 FAS 발현의 하향 조절과 상호적으로 동반됨을 확인하였다. 또한 결장직장 세포에서 MIR196B가 FAS 발현을 직접 억제함을 보였다. 더 나아가 anti-MIR196B는 FAS 발현을 상향 조절하고 결장직장암 세포주에서 아폽토시스를 증가시켰다. 본 연구 결과는 MIR196B의 상향 조절이 FAS 발현을 부분적으로 억제함으로써 결장직장암 세포에서의 아폽토시스를 조절함을 시사하며, anti-MIR196B는 결장직장암 치료를 위한 잠재적 항암 약물 후보가 될 수 있음을 보여준다.