수지상세포(DC) 및 관련 면역세포에 대한 박테린.

벤즈이미다졸계 구충제인 펜벤다졸(Fenbendazole, FBZ)은 수십 년 동안 동물에서 항기생충제로 안전하게 사용되어 왔으며, FBZ의 항암 효과는 다양한 기전들을 통해 연구되어 왔다. 그러나 림프종을 포함하는 in vivo 연구는 부족한 실정이다. 이에 본 연구는 EL-4 세포와 마우스 T 림프종 모델에서 FBZ의 효과를 평가하였다. FBZ는 EL-4 세포에서 G2/M기 정지를 유도하였고, 그 결과 세포 사멸과 대사 활성의 감소가 나타났다. 그러나 FBZ는 in vivo에서 EL-4 마우스 림프종 모델에 대해 항암 효과를 보이지 않았는데, 이는 급격한 체중 감소와 대조군과 유사한 종양 성장에서 확인되었다. FBZ 처리한 EL-4 세포는 대조군에 비해 종양 미세환경(TME)에서 T 세포 면역과 연관된 PD-L1 및 CD86의 발현 수준이 더 높았다. 또한 FBZ 처리 종양 조직의 헤마톡실린-에오신(Hematoxylin and eosin) 염색에서는 활발히 증식하는 암 조직에서 관찰되는 별하늘(starry sky) 양상이 나타났으며, 면역조직화학 분석에서는 면역억제성 M2 대식세포의 비율이 높은 것으로 확인되었다. TME에서 면역 활성과 관련된 이러한 변화는 in vitro 실험 결과와 상반되며, FBZ가 이러한 반응을 유도하는 상세한 기전에 대해서는 추가 연구가 필요하다.

두 가지 항암제에 의해 손상된 수지상세포(DCs)에서 bacterin(sBb)의 효과를 조사하였다. DCs는 숙주의 선천성 및 적응성 면역에서 중요한 역할을 하며, 특히 종양 성장을 억제할 수 있는 T 세포를 활성화한다. DC의 대사 활성은 대조군 DC에 비해 sBb 처리 후 유의하게 증가하였다. 또한 DOX 처리된 DC와 DOX + sBb 처리된 DC 사이에서 미토콘드리아 무결성에 뚜렷한 변화가 관찰되었다. 유세포분석 결과 sBb는 DC의 표면 마커 발현, 특히 CD54의 발현을 상향 조절함이 확인되었다. 혼합 림프구 반응에서 sBb는 DC의 항원제시 능력을 유의하게 증가시켰다. 특히 sBb는 대조군 DC의 능력을 약 150% 증가시켰고, VC 처리된 DC의 능력은 221% 증가시켰다. 이러한 결과는 sBb가 항암 약물로 인한 DC 손상을 방어하기 위한 잠재적 면역자극제(agent)로 활용될 수 있으며, 면역치료에서 DC와 빈크리스틴(vincristine)의 병용 사용에 대한 기초 정보를 제공할 수 있음을 시사한다.

DSF는 항암제 후보로서 널리 연구되어 왔으며, 많은 항암제가 골수억제를 유발한다. 이와 관련하여, 본 연구는 기초과학 및 임상 연구자들에게 유용한 정보를 제공할 수 있다.

메트포르민은 부작용이 적은 비인슐린 의존성 당뇨병 치료에 널리 사용되는 치료제로, 간의 포도당신생합성 및 위장관에서의 포도당 흡수를 억제함으로써 작용한다. 림프종은 개에서 가장 흔한 혈액 종양 중 하나이다. 화학요법은 주로 림프종에 사용되지만, 중증의 부작용이 있으므로 림프종에 대한 항암제 개발을 위한 추가 연구가 필요하다. 본 연구는 마우스 T세포 림프종인 EL4 세포에서 메트포르민 단독 및 포도당 유사체인 2-deoxy-D-glucose (2-DG)와의 병용이 항암 효과에 미치는 영향을 조사하였다. 메트포르민은 EL4 세포의 대사 활성을 감소시켰으며, 2-DG와 병용 시 부가적 효과를 보였다. 또한 트리판 블루 배제 시험, Hochest 33342/propidium iodide (PI) 염색, Annexin V/PI 염색을 통해 세포사멸을 확인하였다. 작용기전을 규명하기 위한 세포주기 및 미토콘드리아 막전위(MMP) 분석 결과, 메트포르민은 EL4 세포의 G2/M기 진행을 중단시켰고, 메트포르민 + 2-DG는 MMP를 감소시켰다. 메트포르민은 EL4 세포에서 G2/M기 정지 기전을 통해 항암 효과를 나타냈으며, MMP 감소를 통해 2-DG와 병용 시 부가적 효과를 보였다. 세포독성 화학요법 항암제와 달리 메트포르민과 2-DG는 세포의 포도당 대사와 관련되어 있으며 독성이 거의 없다. 따라서 메트포르민과 2-DG는 화학요법 항암제에 의해 유발되는 독성을 줄이기 위한 대안이 될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 림프종 치료에 사용되기 전에 메트포르민과 2-DG의 생체 내 효능을 검증하기 위한 연구가 필요하다.

벤즈이미다졸계 구충제인 페벤다졸(Fenbendazole, FBZ)은 기생충 감염의 치료에 널리 사용된다. FBZ의 항암 효과는 최근까지 주목을 받아 잠재적 항암제로서의 가능성이 거론되고 있다. 이전 연구들에서 FBZ가 암세포에 미치는 영향이 보고되었음에도 불구하고, FBZ가 림프종 세포 및 정상 면역 세포에 미치는 영향에 관한 연구는 부족한 실정이다. 이에 본 연구에서는 양성 대조군으로 빈크리스틴을 사용하여, 마우스 림프종 세포주인 EL-4 세포와 비장 세포에 대한 FBZ의 영향을 조사하였다. FBZ는 EL-4 세포의 세포 대사 활성은 감소시켰으나, 비장 세포의 대사 활성은 감소시키지 않았다. 또한 FBZ는 EL-4 세포에서 미토콘드리아 막전위의 감소와 활성산소종 생성의 유도를 유발했으나, 비장 세포에서는 이러한 변화가 관찰되지 않았다. FBZ는 G2/M기 정지를 유도하고 sub G0/G1기 비율을 증가시켜, 세포자멸사를 시사하였다. 더불어 대조군 세포와 비교할 때, FBZ로 전처리한 비장 세포의 리포다당단백질(lipopolysaccharide)에 대한 반응성은 유지되었다. 요약하면, FBZ는 EL-4 세포에는 세포독성이 있으나 비장 세포에는 그렇지 않다. 본 연구는 FBZ가 항암 효과를 나타내며, 정상 비장 세포에 대해서는 세포독성과 기능적 손상이 상대적으로 적음을 뒷받침하는 실험적 근거를 제공한다.

알코올 중독 치료제인 디설피람(DSF)은 최근 항암 효과에 근거하여 용도전환 약물로 사용되고 있다. 면역 항상성과 암 치료에서 수지상세포(DCs)의 핵심적 역할에도 불구하고, DSF가 DCs의 생존과 기능에 미치는 영향은 아직 연구되지 않았다. 따라서 우리는 DSF와 리포다당질(lipopolysaccharide, LPS)로 골수 유래 DCs를 처리하고 다양한 분석을 수행하였다. DCs는 DSF에 대해 내성이 있으며, 골수세포 및 비장세포에 비해 세포독성이 낮았다. DCs의 생존율과 대사 활성은 LPS의 부재 또는 존재 하에서 DSF 처리 이후 거의 감소하지 않았다. DSF는 표면 마커(MHC II, CD86, CD40, CD54) 발현, 항원 섭취 능력, 또는 LPS 처리된 DCs의 항원제시 능력을 변화시키지 않았다. 그러나 DSF는 LPS 처리된 DCs에서 인터루킨(interleukin, IL)-12/23(p40) 생산을 감소시켰으며, IL-6 또는 종양괴사인자-α는 변화시키지 않았다. 우리는 과립구-대식세포 집락자극인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)를 DSF 유도 세포독성에 대해 DCs가 내성을 갖게 하는 요인으로 간주하였다. GM-CSF를 투여하지 않거나 그 신호전달을 억제하면 DCs의 DSF에 대한 내성이 감소하였다. 또한 GM-CSF는 DCs의 생존에 필수적인 전사인자 XBP-1의 발현을 상향 조절하였다. 본 연구는 DSF가 처음으로 DCs의 기능을 변화시키지 않고, 낮은 세포독성을 나타내며, 차등적인 사이토카인 생산을 유도한다는 점을 입증하였다.

디설피람(DSF)은 알코올 의존 환자를 알데하이드 탈수소효소를 억제함으로써 치료하는 시판 약물이다. 지난 수십 년 동안 DSF는 서로 다른 기전을 통해 항암 효과를 나타내는 것으로 보고되어 왔다. 또한 이러한 효과는 구리(Cu)와 함께 사용할 때 더욱 증대될 수 있다. 다양한 암종에 대한 후속 연구가 수행되었으나 림프종에 대해서는 상대적으로 소수만이 진행되었다. 본 연구는 림프종에 대한 DSF의 항암 효과와, Cu를 처리했을 때 그 효과가 어떻게 변화하는지에 대해 조사하였다. DSF는 Cu와 병용했을 때 EL4 림프종 세포의 대사 활성을 상승적으로(synergistically) 감소시켰다. DSF를 단독으로 1 µM 처리한 경우 EL4 세포의 대사 활성은 대조군 대비 49% 감소한 반면, DSF + CuCl2 처치에서는 87% 감소하였다. 로다민 123 및 2',7'–dichlorofluorescein diacetate 염색은 DSF가 미토콘드리아 막전위의 감소를 유도하고 반응성 산소종의 생성을 촉진함을 보여주었다. 특히 DSF + Cu의 병합 처치는 annexin V-플루오레세인 이소티오시아네이트/프로피디움 아이오다이드 염색을 포함한 여러 분석 결과에 근거하여 세포 사멸을 유도하였다. 종합하면, DSF는 림프종 세포에 대해 항암 효과를 가지며, Cu와 병용 시 상승적 효과를 나타낸다. 본 연구는 임상 및 기초연구에서 DSF의 사용 범위를 확장하는 데 유용한 정보를 제공한다.

수지상세포(DC) 및 관련 면역세포에 대한 박테린.

벤즈이미다졸계 구충제인 펜벤다졸(Fenbendazole, FBZ)은 수십 년 동안 동물에서 항기생충제로 안전하게 사용되어 왔으며, FBZ의 항암 효과는 다양한 기전들을 통해 연구되어 왔다. 그러나 림프종을 포함하는 in vivo 연구는 부족한 실정이다. 이에 본 연구는 EL-4 세포와 마우스 T 림프종 모델에서 FBZ의 효과를 평가하였다. FBZ는 EL-4 세포에서 G2/M기 정지를 유도하였고, 그 결과 세포 사멸과 대사 활성의 감소가 나타났다. 그러나 FBZ는 in vivo에서 EL-4 마우스 림프종 모델에 대해 항암 효과를 보이지 않았는데, 이는 급격한 체중 감소와 대조군과 유사한 종양 성장에서 확인되었다. FBZ 처리한 EL-4 세포는 대조군에 비해 종양 미세환경(TME)에서 T 세포 면역과 연관된 PD-L1 및 CD86의 발현 수준이 더 높았다. 또한 FBZ 처리 종양 조직의 헤마톡실린-에오신(Hematoxylin and eosin) 염색에서는 활발히 증식하는 암 조직에서 관찰되는 별하늘(starry sky) 양상이 나타났으며, 면역조직화학 분석에서는 면역억제성 M2 대식세포의 비율이 높은 것으로 확인되었다. TME에서 면역 활성과 관련된 이러한 변화는 in vitro 실험 결과와 상반되며, FBZ가 이러한 반응을 유도하는 상세한 기전에 대해서는 추가 연구가 필요하다.

두 가지 항암제에 의해 손상된 수지상세포(DCs)에서 bacterin(sBb)의 효과를 조사하였다. DCs는 숙주의 선천성 및 적응성 면역에서 중요한 역할을 하며, 특히 종양 성장을 억제할 수 있는 T 세포를 활성화한다. DC의 대사 활성은 대조군 DC에 비해 sBb 처리 후 유의하게 증가하였다. 또한 DOX 처리된 DC와 DOX + sBb 처리된 DC 사이에서 미토콘드리아 무결성에 뚜렷한 변화가 관찰되었다. 유세포분석 결과 sBb는 DC의 표면 마커 발현, 특히 CD54의 발현을 상향 조절함이 확인되었다. 혼합 림프구 반응에서 sBb는 DC의 항원제시 능력을 유의하게 증가시켰다. 특히 sBb는 대조군 DC의 능력을 약 150% 증가시켰고, VC 처리된 DC의 능력은 221% 증가시켰다. 이러한 결과는 sBb가 항암 약물로 인한 DC 손상을 방어하기 위한 잠재적 면역자극제(agent)로 활용될 수 있으며, 면역치료에서 DC와 빈크리스틴(vincristine)의 병용 사용에 대한 기초 정보를 제공할 수 있음을 시사한다.