▶ GABRD와 THBS4의 상관관계를 확인하기 위해 대장암세포에 GABA를 처리하고 GABRD, PDGF-D, TGFß, PDGFRß, TGFR, IP3R, STIM1 등의 인자들의 발현 및 활성 분석 ▶ GABRD가 GABA를 통해 암세포에 미치는 영향을 확인하기 위해 암세포의 증식, 이동, 부착 분석 ▶ THBS4에 미치는 영향을 확인하기 위해서 THBS4의 발현 및 분비 수준을 확인하고 THBS4의 분비에 관여하는 Ca2+의 변화 분석 ▶ GABRD와 THBS4의 상관관계를 좀 더 상세히 분석하기 위해 대장암세포에 GABA 및 THBS4에 영향을 미치는 다양한 인자들에 대한 knock-down을 이용하여 새로운 매커니즘 확인 ▶ 대장암 환자의 정상조직과 종양조직으로부터 각각의 ECM을 구축한 3D 환경에서 대장암 세포를 배양하고 GABA 및 GABA 억제제를 처리한 후 THBS4의 분비 수준 확인 ▶ 3D 구축된 정상조직의 ECM 및 종양조직의 ECM에 GFP(green)를 형질도입 시킨 대장암세포와 mCherry(red)를 형질도입 시킨 ECFC(혈관내피세포)를 공동배양한 뒤 GABA 및 GABA 억제제를 처리하여 혈관형성, 종양세포 성장, 종양조직 양상 확인 ▶ HCT116 세포와 같은 대장암세포를 마우스의 대장 내 주입하여 종양을 유발시키고 간 전이를 확인 ▶ THBS4 knockout mice를 제작한 후 등 부위에 matrigel plug를 피하주사한 뒤 GABA를 plug에 매일 주입. 약 2주 후 plug 추출하여 CD31, α-actin을 통한 신생혈관 생성, THBS4 수준 확인 ▶ 대장암세포를 GABRD knockout mice의 대장 내 주입하여 종양을 유발시키고 간 전이 확인. 마우스들의 정상조직 및 종양조직을 추출하여 각각의 3D ECM을 구축한 환경에서 혈관형성, 종양세포 성장, 종양조직 양상 확인